[发明专利]戊型肝炎病毒IgG抗体化学发光免疫测定试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及体外诊断免疫分析技术领域，属于血清(桨)中戊型肝炎IgG抗体检测的化学发光酶免疫分析测定试剂盒。同时，本发明提供了一种戊型肝炎病毒IgG抗体化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法。

背景技术

戊型肝炎病毒(hepatitis E virus，HEV)是无包膜的单正链RNA病毒，经粪口途径传播，引起的急性戊型肝炎(hepatitisE，HE)，多表现为急性黄疽型肝炎，易发展为亚急性重症肝炎或淤胆肝炎。近年来呈逐年上升趋势。患者主要为成年人，病死率较高，尤其孕期最后3个月的妊娠妇女患病后，病死率可达10％～39％，危害严重。戊型病毒性肝炎，首先在印度次大陆发现，中亚、东南亚、非洲、印度次大陆均有较大流行的报道。多数爆发流行为水源性的。食源性的报道亦见诸文献。我国人群戊型肝炎的感染率约18％。急性散发性肝炎中戊肝约占10％，是我国乙类法定传染病之一。通过了解戊型肝炎病毒(HEV)感染后抗-HEVIgG存在持续的时间，以准确、客观评估抗-HEVIgG在戊型肝炎(戊肝)诊断中的意义。

目前戊肝的诊断主要是通过ELISA(酶联免疫法)检测抗HEV抗体，其次有放射免疫分析(RIA)、免疫印迹测法、RT-PCR方法、实时荧光RT-PCR方法等。免疫印迹测法灵敏度不如ELISA、RIA、RT-PCR及实时荧光RT-PCR方法，ELISA试剂灵敏度不如RIA、RT-PCR及实时荧光RT-PCR试剂，对HEV感染窗口期患者不能提早诊断；而常规RIA灵敏度虽高，半衰期短，容易形成放射污染；RT-PCR及实时荧光RT-PCR方法操作繁琐，稳定性差、仪器昂贵。鉴于此本发明建立了一种快速、敏感、特异性强的化学发光酶促免疫分析方法来检测戊型肝炎病毒抗体。即有放射免疫分析、荧光免疫分析等方法的高度灵敏性，又克服了这些方法的缺点。

现在，化学发光免疫分析试剂盒多为进口封闭式全自动化学发光测量系统，设备昂贵，使用成本高，从而限制了推广使用，无法广泛地应用于临床诊断和科研工作。本发明的试剂盒采用微孔板化学发光免疫分析技术，既可应用于开放式的半自动化学发光测量仪，也可用于全自动的测量系统，可实现大批量快检测，使用成本低，更能适合在大、中、小医院推广应用。

发明内容

本发明采用间接法原理，利用化学发光酶免疫分析技术，以酶标记抗原或抗体与样品中待测物发生免疫反应，所形成的免疫复合物上的酶再作用于发光底物，产生的光信号强度与参与反应的酶分子数(活性)成正比，根据发光信号可判断待测物的浓度或含量的变化。

本发明的目的是：提供一种化学发光免疫分析测定戊型肝炎病毒IgG抗体的试剂盒。本发明试剂盒包括：戊型肝炎病毒IgG抗体阴、阳性对照品；包被固相载体；酶标记结合物；样品稀释液；化学发光底物液；以及浓缩洗涤液。

根据本发明的试剂盒，其中，所述固相载体为微孔板、塑料珠、塑料管或磁性颗粒；所述标记酶为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶；所述化学发光底物为1，2-二氧乙烷类衍生物、鲁米诺或异鲁米诺，其中所述1，2-二氧乙烷类衍生物，为(金刚烷)-1，2-二氧乙烷、3-(2′-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3″-磷酰氧基)苯基-1，2-二氧乙烷(AMPPD)、CSPD或CDP-Star。

本发明的再一目是提供本发明试剂盒的制备方法。采用间接法原理，利用化学发光酶免疫分析技术，间接方法检测血清(浆)样本中的戊型肝炎病毒IgG抗体。该发明试剂盒的制备方法是：以戊型肝炎病毒IgG抗体阴、阳性血清制备的对照品；以重组戊型肝炎病毒抗原包被固相载体；以酶标记抗人IgG抗体(单抗或多抗)；配制样品稀释液；配制上述酶所作用的化学发光底物液；配制浓缩洗涤液；分装上述各组份；并组装为成品。

根据本发明的方法，所述固相载体包被的步骤2)包括以下步骤：用0.1MpH值为9.0的磷酸氢二钾(K₂HPO4·3H₂O)缓冲液配制成所需浓度的重组戊型肝炎病毒抗原包被液，并将包被液负载于固相载体上；再用含0.1％酪蛋白，0.01％明胶，0.1％Proclin300，pH值为7.0～7.5，浓度为0.01M的磷酸盐缓冲液作为封闭液封闭上述的固相载体。