[发明专利]戊型肝炎病毒IgM抗体化学发光免疫测定试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及临床体外诊断免疫分析医学领域，具体地，本发明提供了一种戊型肝炎病毒IgM抗体化学发光免疫测定试剂盒及其制备方法。

背景技术

戊型肝炎病毒(hepatitis E virus，HEV)是无包膜的单正链RNA病毒，经粪口途径传播，引起的急性戊型肝炎(hepatitisE，HE)，多表现为急性黄疽型肝炎，易发展为亚急性重症肝炎或淤胆肝炎。近年来呈逐年上升趋势。患者主要为成年人，病死率较高，尤其孕期最后3个月的妊娠妇女患病后，病死率可达10％～39％，危害严重。戊型病毒性肝炎，首先在印度次大陆发现，中亚、东南亚、非洲、印度次大陆均有较大流行的报道。多数爆发流行为水源性的。食源性的报道亦见诸文献。我国人群戊型肝炎的感染率约18％。急性散发性肝炎中戊肝约占10％，是我国乙类法定传染病之一。在急性期血清中可测出高滴度的抗HEV-IgM，恢复期抗HEV-IgM滴度下降或消失。但取而代之的是血清中产生抗HEV-IgG。血清中抗-HEV1gM出现，是HEV急性感染和近期感染的血清学证据；具有比HEVIgG抗体更高的诊断价值，因此对戊型肝炎的早期诊断和预防有着重要意义。

目前国内常用的戊型肝炎诊断方法有：免疫荧光法、免疫电子显微镜、逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)、特异性抗体检测法。免疫荧光法检测肝组织中戊型肝炎病毒抗原，此方法须进行肝穿活检；免疫电子显微镜检测急性期患者的粪便及胆汁中病毒抗原或用已知患者血清中相应的抗体；逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测戊型肝炎病毒核糖核酸(HEV-RNA)。戊型肝炎病毒特异性抗体酶联免疫法检测法是目前医院主要的检测方法，其测定抗HEV-IgM具有临床意义。由于ELISA试剂方法的灵敏度不如化学发光试剂高，对HEV感染窗口期患者不能提早诊断；RT-PCR、免疫荧光法方法、免疫电子显微镜检测法，操作繁琐，稳定性差、仪器昂贵、有局限性。鉴于此，本发明建立了一种快速、敏感、特异性、稳定性强的化学发光酶促免疫分析方法来检测戊型肝炎病毒抗体。

现在，化学发光免疫分析试剂盒多为进口封闭式全自动化学发光测量系统，设备昂贵，使用成本高，从而限制了推广使用，无法广泛地应用于临床诊断和科研工作。本发明的试剂盒采用微孔板化学发光免疫分析技术，既可应用于开放式的半自动化学发光测量仪，也可用于全自动的测量系统，可实现大批量快检测，使用成本低，更能适合在大、中、小医院推广应用。

发明内容

本发明的目的是：提供一种化学发光免疫分析测定戊型肝炎病毒IgG抗体的试剂盒。该发明试剂盒能够简便、快速、灵敏、设备简单、重复性较好、无污染能稳定地检测戊型肝炎病毒IgM抗体，并适于在产业上有效地推广应用。

根据本发明的试剂盒包括：戊型肝炎病毒IgM抗体阴、阳性对照品；包被固相载体；酶标记结合物；酶所作用的化学发光底物液；以及浓缩洗涤液。

根据本发明的试剂盒，其中，所述包被固相载体为微孔板、塑料珠、塑料管或磁性颗粒；所述酶为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶；所述化学发光底物液为1，2-二氧乙烷类衍生物、鲁米诺或异鲁米诺，其中所述1，2-二氧乙烷类衍生物为(金刚烷)-1，2-二氧乙烷、3-(2′-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3″-磷酰氧基)苯基-1，2-二氧乙烷(AMPPD)、CSPD或CDP-Star。

本发明采用捕获夹心法原理，利用化学发光免疫分析法测定戊型肝炎IgM抗体水平的变化。包被高纯度抗人-μ链包被微孔板，酶标记特异性重组戊型肝炎病毒抗原。在包被板微孔中加入稀释的待测样本、酶标记物，温育后形成固抗体-抗体-酶标抗原的复合物，充分洗涤后加入化学发光底物液，测定其发光强度(RLU)。根据样本的RLU值随抗-IgM抗体浓度的增加而升高，从而判定戊型肝炎病毒IgM抗体在人体里的变化情况。

本发明的另一目提供了一种制备上述试剂盒的方法，包括以下步骤：

1)以戊型肝炎病毒IgM抗体阴、阳性血清制配对照品：戊型肝炎病毒IgM抗体阴、阳性对血清为经HBsAg、抗-HIV、抗-TP以及抗-HCV抗体测定均为阴性的多份混合血清，60℃灭活1小时，适度稀释配制(抗-HEVIgM抗体阳性效价＞1∶500)