[发明专利]甲型肝炎病毒IgM抗体化学发光免疫测定试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及免疫分析医学领域，具体地，本发明提供了一种甲型肝炎病毒IgM抗体化学发光免疫测定试剂盒及其制备方法。

背景技术

甲型肝炎是由甲型肝炎病毒(HAV)通过粪-口途径传播引起的一种以肝脏损害为主的传染性疾病。是一种RNA病毒，属微小核糖核酸病毒科，为肠道病毒72型，呈球形直径约27nm，由32个壳微粒组成对称20面体核衣壳，内含线型单股RNA。HAV具有4个主要多肽，为构成病毒壳蛋白的主要抗原多肽，诱生中和抗体。HAV存在于患者的血液、粪便及肝胞浆中。感染后血清中抗-HAV1gM抗体很快出现，在2周左右达高峰。然后逐渐下降，在8周之内消失，是HAV急性感染和近期感染的血清学证据；具有比HAVIgG抗体更高的诊断价值，对甲型肝炎的早期诊断和预防有着重要意义。

甲型肝炎病毒(HAV)IgM抗体实验室检测方法主要为免疫分析，常用检测方法为放射免疫分析(RIA)和酶免疫分析(EIA)。目前使用最广的为酶免疫分析(EIA)。

近年来标记免疫分析技术的研究和应用发展迅速，已广泛应用于生物医学基础理论研究及临床疾病诊断各领域。易于推广的主要有：放射免疫分析、酶免疫分析、时间分辨荧光免疫分析和化学发光免疫分析等四种。这些超微量检测技术的基本理论大体相同，但是所用示踪剂及所发出的信号各不相同。根据大量的试验结果及临床应用资料，从实用性、稳定性、准确性及发展前景来看，依次为：化学发光免疫分析、时间分辨荧光免疫分析、放射免疫分析以及酶免疫分析。化学发光免疫分析技术，既具有放射免疫分析、时间分辨荧光免疫分析等方法的高度灵敏性，线性范围宽的优点，又克服了放射免疫分析的放射性污染、半衰期短及时间分辨荧光免疫分析稳定性差、仪器昂贵等缺点，能广泛应用于生物医学研究和临床医学检验，更便于在大、中、小医院推广应用。

目前，化学发光免疫分析技术正在体外诊断免疫分析试剂方面广泛运用，但采用直接包被抗原结合化学发光免疫分析技术在甲型肝炎病毒IgM抗体免疫分析产品的应用方面仍未见使用。本发明的试剂盒采用微孔板化学发光免疫分析技术，既可应用于开放式的半自动化学发光测量仪，也可用于全自动的测量系统，可实现大批量快检测，使用成本低，更易推广应用。

发明内容

本发明同时很好地解决了上述问题，将化学发光技术与甲型肝炎病毒IgM抗体的免疫分析学有效地结合，提供了一种能够简便、快速、灵敏、稳定地检测甲型肝炎病毒IgM抗体的试剂盒，该试剂盒适于在产业上有效地推广和应用。

本发明的目的是提供一种化学发光酶免疫分析测定甲型肝炎病毒IgM抗体的试剂盒及其制备方法。

根据本发明的试剂盒包括：1)甲型肝炎病毒IgM抗体阴、阳性对照品；2)包被的固相载体；3)甲型肝炎病毒抗原液；4)酶标记的甲型肝炎病毒抗体(单抗或多抗)；5)上述酶所作用的化学发光底物；以及6)浓缩洗涤液。

根据本发明的试剂盒，其中，所述固相载体为微孔板、塑料珠、塑料管或磁性颗粒；所述标记酶为碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶；所述化学发光底物为1，2-二氧乙烷类衍生物、鲁米诺或异鲁米诺，其中所述1，2-二氧乙烷类衍生物为(金刚烷)-1，2-二氧乙烷、3-(2′-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3″-磷酰氧基)苯基-1，2-二氧乙烷(AMPPD)、CSPD或CDP-Star。

进一步，本发明提供了一种制备上述试剂盒的方法，包括以下步骤：

1)以甲型肝炎病毒IgM抗体阴、阳性血清制备对照品；

2)以抗人-μ链抗体(单抗或多抗)包被固相载体；

3)以甲型肝炎病毒抗原制备抗原液；

4)以酶标记甲型肝炎病毒抗体(单抗或多抗)；

5)制备化学发光底物液；

6)制备浓缩洗涤液

7)分装上述甲型肝炎病毒IgM抗体阴、阳性对照品、甲型肝炎病毒抗原液、酶标记的甲型肝炎病毒抗体、该酶所作用的化学发光底物和浓缩洗涤液；以及

8)组装为成品。

根据本发明的方法，优选，所述包被固相载体的步骤2)包括以下步骤：

1)包被

用0.1M pH值为9.0的磷酸氢二钾缓冲液配制成所需浓度的抗人-μ链抗体(单抗或多抗)包被液，并将包被液负载于固相载体上；

2)封闭

用含2％ BSA，0.01％明胶，pH值为6.8～7.3，浓度为0.01M的磷酸盐缓冲液作为封闭液封闭上述的固相载体。