[发明专利]一种牛乳中a－乳白蛋白含量的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种分析检测乳中蛋白的方法，特别是一种检测牛乳中a-乳白蛋白含量的方法。属于分析技术领域。

背景技术

目前，国内没有α-乳白蛋白含量的检测方法的国家标准和行业标准。国内相关标准有GB/T 5413.2-1997婴幼儿配方食品和乳粉-乳清蛋白的测定。国外，相关国标有DIN-10466-2001牛奶和牛奶制品的全部蛋白中乳清蛋白含量的测定、DIN-10470-1999牛奶和牛奶制品的全部蛋白质中乳蛋白含量和酪蛋白含量测定、DIN-10472-1996牛奶和乳制品总蛋白量中乳蛋白和酪蛋白成分量测定.电泳法。常用α-乳白蛋白的检测方法是液相色谱法。该方法试验步骤较繁杂，检测到出结果时间需3-4h。毛细管电泳仪是一类包括电泳、色谱及其交叉内容的液相微分离技术，它能快速精确检测出牛奶中的掺假成分、抗生素、添加的功能性因子、乳清蛋白、免疫球蛋白、酶、糖、添加剂和其他小分子的含量。该方法操作简便、准确，检测到出结果时间仅为1h左右。

目前，毛细管电泳仪的应用前景非常广泛。许多国际官方权威机构，如FDA、U.S.P、CBER、CDER等均已认可毛细管电泳方法。权威机构European Pharmacopoeia中认可勒沃卡-贝斯庭盐酸盐中杂质的CE测定；欧洲药典中还认可促红细胞生成素(EPO)的CE测定等。它已成为化学、农业、医学、生物工程、药学等众多领域的一个常规科研工具。

发明内容

本发明的目的是得到一种牛乳中a-乳白蛋白含量的检测方法。

本发明的一种检测a-乳白蛋白含量的检测方法，其中，包括如下步骤：1)将a-乳白蛋白溶于样品缓冲液，制备得到多个不同含量a-乳白蛋白的标准溶液，并对多个溶液分别检测后得到a-乳白蛋白含量与检测结果之间的标准曲线；2)对样品进行检测，并得到检测结果；3)将所述的检测结果与所述的标准曲线比对，得到样品中a-乳白蛋白的含量；其中，检测样品的设备是高压毛细管电泳分析仪。

上述步骤1)中标准曲线的制定的方法如下：配制a-乳白蛋白标准溶液，在样品缓冲液中溶解a-乳白蛋白标准物质配制成分别为1mg/ml、0.5mg/ml、0.25mg/ml、0.1mg/ml、0.05mg/ml，制备得到标准溶液，摇匀后使用高压毛细管电泳分析，得到检测结果，即得到a-乳白蛋白含量与平均校正因子的关系曲线；其中，所述的检测结果按照如下方法计算：按峰面积计算出平均校正因子。

上述的标准溶液或待检测样品的处理方法为：把标准溶液或待检测样品装入离心管中，在2000-5000r/min离心条件下离心5-15min，将样品与缓冲液按照1∶4-10的比例加入冻存管，并摇匀，精确提取40ul处理样品加入样品管中，放置于超声波清洗机1～10min，使用毛细管电泳仪测定。上述的样品缓冲液为：能够使蛋白质分散的缓冲液，优选如下缓冲液：

160mmol/L三甲基氨基甲烷缓冲液中加40mmol/L 3-吗啉代丙烷磺酸，60mmol/L乙二胺四乙酸，6mol/L尿素，处理样品时添加5ul/ml的β-巯基乙醇，甲基羟乙基纤维素0.4％。使用0.1M氢氧化钠调至pH值为8.5。

上述的摇匀步骤采用漩涡混合器。

上述高压毛细管电泳分析的使用检测参数如下：毛细管电泳检测检测的温度控制在20～40℃之间，毛细管柱直径25～75μm、长度20～600mm，DAD(或紫外光)检测器，压力进样(或电动进样)，压力为0～1psi，进样时间为1s～20s，分离温度为20～40℃，工作电压为15～30kV。

上述的毛细管柱为石英毛细管柱，包括涂层和未涂层。

上述的高压毛细管电泳分析的检测时电泳模式为区带电泳，其电泳缓冲液为pH3.0～8.0，主要成分为无机盐缓冲液，优选：磷酸盐、硼酸或柠檬酸。

上述的检测结果的处理方法如下：检测结果为样品分离的图谱，运用毛细管电泳仪所带的分析软件，积分各峰的面积，计算出试样浓度，再乘稀释倍数，即得实际浓度。

常乳里α-乳白蛋白含量0.8g～2g/L，质量百分比约0.2％。毛细管电泳仪检测限制浓度10^-5～10^-8mol/L。所以毛细管电泳仪能检测出其含量。使用毛细管电泳仪开发检测a-乳白蛋白含量的方法包括：样品性质的了解、分离模式、建立缓冲体系、优化缓冲体系和换分离模式等步骤。