[发明专利]用于RNA干扰的治疗用途的方法及组合物

说明书

本申请是以下申请的分案申请：申请日2002年11月4日，申请号02826662.5，发明名称“用于RNA干扰的治疗用途的方法及组合物”。

发明背景

细胞的结构及生物学行为是通过特定时间的细胞内基因表达模式确定的。长期以来，基因表达的干扰一直被认为是大量疾病产生的原因，这些疾病包括多种形式的癌症、血管病、神经元和内分泌疾病。目前已知，扩增、缺失、基因重排、丧失或获得功能性突变形式的异常表达模式都将导致疾病细胞的异常行为。异常的基因表达也被认为是某些生物避开病原体威胁的一种防御机制。

医学的主要挑战之一便是调控广泛多种生理反应所牵涉的靶基因的表达。虽然在真核细胞内，外源导入转基因的过表达相对简单，但以特定基因为目标的抑制仍然较难实现。抑制基因表达的传统方法，包括位点定向基因破坏、反义RNA或协同抑制或注射，需要复杂的遗传基因操纵，或常常超出宿主细胞毒性耐受水平的大剂量抑制物。

RNA干扰(RNAi)是一种描述了双链(ds)RNA依赖基因的特异遗传转录后沉默的现象。利用该现象实验性地操纵哺乳动物细胞的最初尝试受阻于在响应长dsRNA分子过程中激活的强烈且非特异性的抗病毒防御机制。Gil et al.Apoptosis 2000，5：107-114。该领域在证实21个核苷酸RNA的合成双链体可介导哺乳动物细胞中的基因特异RNAi，而不引发遗传抗病毒防御机制的基础上获得了显著进展。Elbashir et al.Nature 2001，411：494-498；Caplen et al.Proc NatlAcad Sci 2001，98：9742-9747。小的干扰RNA(siRNA)因而成为剖析基因功能的有力工具。化学合成小RNA是一种途径，并已获得有希望的结果。许多研究小组也寻求开发可于细胞内产生这种siRNA的基于DNA的载体。最近，个别研究小组实现了这一目标，并发表了相似的方案，这些方案通常包括短发夹(sh)RNA的转录，这些短发夹RNA可被有效加工而于细胞内形成siRNA。Paddison et al.PNAS 2002，99：1443-1448；Paddison et al.Genes&Dev 2002，16：948-958；Suiet al.PNAS 2002，8：5515-5520；及Brummelkamp et al.Science 2002，296：550-553。这些报导均描述了产生可特异性地靶定众多内源及外源表达基因的siRNA的方法。

发明概述

本发明的一个方面提供了一种包含RNAi构建体的稳定呼吸配方，该RNAi构建体被配制为用于将治疗有效量的RNAi构建体通过肺部或鼻部送递至患者肺部。某些实施方案中，RNAi构建体被配制为平均直径小于20微米，更优选平均直径为0.5-10微米的微粒。某些实施方案中，该微粒由生物可降解聚合物形成。某些实施方案中，该微粒由选自多糖、二酮哌嗪、聚羟酸、聚酐、聚酯、聚酰胺、聚碳酸酯、聚烷撑、聚乙烯基化合物、聚硅氧烷、丙烯酸与异丁烯酸的聚合物、聚氨酯、纤维素、聚丁酸(butic acid)、聚戊酸、聚(交酯-共-己内酯)或其共聚物中的一种或多种聚合物形成。

某些实施方案中，该微粒通过溶剂蒸发、喷雾干燥、溶剂萃取或热融封装形成；而另一些实施方案中，该微粒为干燥或冻干形式。在另一些实施方案中，RNAi构建体被配制在脂质体内。

还有一些实施方案中，RNAi构建体被配制为包括多维聚合物网状结构的超分子复合物。优选的超分子复合物由阳离子聚合物形成，诸如聚(L)赖氨酸(PLL)、聚氮丙啶(PEI)、含β-环糊精聚合物(βCD聚合物)或其共聚物。更为优选的超分子复合物由环糊精改性的聚合物形成，例如，具有下式的结构的环糊精改性的聚氮丙啶：

其中

对每种情况而言，R独立代表H、低级烷基、环糊精部分或且

对每种情况而言，m独立代表2-10,000，优选10-5,000，或者100-1,000中的一个整数。

某些实施方案中，包含RNAi构建体的呼吸配方包括推进剂。