[发明专利]一种鉴定转基因植物拷贝数的简单新方法

权利要求书

1.一种鉴定转基因植物拷贝数的简单新方法，包括以下的步骤：

第一步，采集待检测样品的幼嫩叶片，提取总DNA，并将所有样品的DNA浓度调整一致；

第二步，设计待测目标基因和内标基因的特异引物，在转基因植物PCR检测基础上，选取PCR产物在电泳图像中最亮带的样品为确定PCR最佳循环数的样品，并以该样品为模板，将目标基因和内标基因做系列循环数的PCR产物电泳，在数字化电泳图像中，随着PCR循环数的增加，目标带的光密度值增加，选择目标基因带光密度值出现拐点，内标基因的带也清晰可见的循环数确定为最佳循环数；

第三步，做目标基因和内标基因在相同最佳循环数下的平行PCR及琼脂糖电泳，然后根据二者在电泳图像中的光密度值的比值来确定目标基因的拷贝数。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述第三步中的平行PCR，是指做同一样品模板的PCR反应混合液，均分成等份后再加入不同引物，除引物及其相应的退火温度不同之外，PCR反应液的含量和体积、循环数、循环反应条件均相同。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于第三步中所述的数字化电泳图像的光密度值比较是利用MATLAB软件的自编程序完成，比值接近1∶1的为单拷贝外源基因插入，大于等于2∶1的为多拷贝外源基因插入。