[发明专利]耐高温强碱的克劳氏芽孢杆菌、分泌的蛋白酶及制备

说明书

发明领域

本发明涉及微生物发酵及其产物酶领域。具体的说，本发明涉及一种耐高温耐盐碱的克劳氏芽孢杆菌(Bacillus clausii)、分泌的蛋白酶及其生产制备方法。

背景技术

碱性蛋白酶在工业上具有巨大的应用潜力，如洗涤剂、皮革制造、食品加工、制药以及废物处理等工业中，碱性蛋白酶取代传统化学试剂能显著改善产品品质、节约成本，消除制革等工业污染物，减轻对环境的污染，并在工业应用中具有举足轻重的作用。

为了得到有工业价值的碱性蛋白酶，最近对来源于极端环境下的耐碱菌株展开了深入的研究，经研究可分离得到具有良好的热稳定性、抗氧化性和广泛pH耐受性的碱性蛋白酶，从而可以满足工业需要，促进工业的快速发展。几十年来国外在不断选育新菌种，美、日、印等国学者对来源于极端环境下的嗜碱微生物进行了深入的研究，经分离得到了具有良好的热稳定性、抗氧化性和广泛pH耐受性的酶。

1999年Uttam等从水样中分离得到一株芽孢短杆菌，分泌的胞外酶最适水解pH为10.5，最适水解温度为37℃，50℃、60℃的半衰期分别为60小时、70小时(Uttam Chand Baner jee，Rajesh Kumar Sani，Wamik Azmi，Raman Soni.Thermostable alkaline protease from Bacillus brevis and itscharacterization as a laundry detergent additive.Process Biochemistry，1999，35：213-219)。

2001年Johnvesly等报道从嗜碱菌株Bacillus sp.JB-99中分离得到一种耐热的碱性蛋白酶，酶作用的最适温度为70℃(B.Johnvesly，G.R.Naik.Studies on production of thermostable alkaline protease fromthermophilic and alkaphilic Bacillus sp.JB-99 in a chemically definedmedum.Process Biochemistry，2001，37：139-144)。

2002年Kanekar等报道了两株从碱性湖泊中分离得到的产碱性蛋白酶菌株A.ramosus和B.alcalophilus，它们在65℃下分泌的蛋白酶的最适pH分别为11和10，在碱性范围内水解蛋白质的能力都十分的稳定(Kanekar PP，Nilegaonkar SS，Sarnaik SS，Kelkar AS.Optimization of protease activityof alkaliphilic bacteria isolated from alkaline lake in India.Bioresource Technology，2002，85：87-93)。

2003年Joo等报道了一株从韩国西海仁川港口的淤泥滩中筛选得到的嗜碱克劳氏芽孢杆菌(Bacillus clausii)I-52，其外分泌的碱性蛋白酶的最适pH11，最适温度60℃，在氧化剂和SDS存在的条件下具有极高的稳定性，用5％SDS和10％H2O2处理72小时仍可分别保持原来酶活的75％和110％以上(Joo，H.S.，Kumar，C.G.，Park，G.C.，Paik，S.R.and Chang，C.S.Oxidant and SDS-stablealkaline protease from Bacillus clausii I-52：production and someproperties.Journal of Applied Microbiology，2003，95：267-272)。该菌株只能在碱性条件下生长，菌株分泌的蛋白酶为碱性蛋白酶，在碱性下具有较大的活性，最适pH分别是pH11和10.5。