[发明专利]耐高温强碱的克劳氏芽孢杆菌、分泌的蛋白酶及制备

权利要求书

1、一种具有耐高温耐强碱的克劳氏芽孢杆菌(Bacillus clausii)CGMCCNo.1768。

2、一种如权利要求1所述的耐高温耐强碱的克劳氏芽孢杆菌(Bacillus clausii)CGMCC No.1768的生产方法，其特征在于，其包括，

A：对克劳氏芽孢杆菌(Bacillus clausii)CGMCC No.1768进行菌种活化培养步骤；

B：利用步骤A获得的活化菌种进行发酵步骤；

C：发酵后的纯化提取步骤。

3、如权利要求2所述耐高温耐强碱的克劳氏芽孢杆菌(Bacillus clausii)CGMCCNo.1768的生产方法，其特征在于，在菌种活化培养中，该菌株生长温度范围是4-86℃，培养温度38℃，能够分别在0％-20％的NaCl浓度、pH5.5-13.6的条件下生长。

4、如权利要求2所述耐高温耐强碱的克劳氏芽孢杆菌(Bacillus clausii)CGMCCNo.1768的生产方法，其特征在于，在发酵培养步骤中，发酵温度36～43℃，饱和氧度大于30％，补加浓氨水和4mol/L HCl溶液控制pH值，搅拌速度250r/min、发酵罐维持0.1MPa、发酵周期48-72h。

5、如权利要求3所述的耐高温耐强碱的克劳氏芽孢杆菌(Bacillus clausii)CGMCC No.1768的生产方法，其特征在于发酵中，菌株最适培发酵温度42.5℃，并可在pH13和80℃的双重胁迫条件下生长。

6、一种高温碱性蛋白酶，其特征在于，其利用权利要求1所述的克劳氏芽孢杆菌(Bacillus clausii)CGMCC No.1768，由权利要求2所述的生产方法制备而成。

7、如权利要求6所述的高温碱性蛋白酶，其特征在于，该高温碱性蛋白酶为一种热稳定的碱性丝氨酸蛋白酶，其最适温度是75℃，最适pH是10.5。

8、如权利要求7所述的高温碱性蛋白酶，其特征在于，该碱性丝氨酸蛋白酶85℃培育2小时保留原来酶活的65％，在pH13.0条件下稳定性为80％，其它pH条件下，剩余酶活也保持在60％以上，可使高温碱性蛋白酶的应用温度升高20℃，并对SDS、H₂O₂、TritonX-100具有极强的稳定性，用1％SDS、1％H₂O₂、1％TritonX-100处理48小时后能分别保持原来酶活的262.2％、117.5％、102.5％，Cu²⁺、Fe²⁺，Mn²⁺能提高酶活，Mg²⁺、Co²⁺能降低酶活。

9、一种如权利要求6所述高温碱性蛋白酶的序列，其特征在于，该序列共有1376bp，开放阅读框从190-1255bp，序列891、1039、1070、1233位分别是A/G、A/G、A/T、C/T，197位为C，424位为G。

10、如权利要求9所述的高温碱性蛋白酶的氨基酸序列，其特征在于，该高温碱性蛋白酶的分子量为38046道尔顿，是一种热稳定的碱性蛋白酶(thermostable alkaline protease)。