[发明专利]人参皂甙Rg1对自身免疫性脑脊髓炎小鼠的干预作用

权利要求书

1、一种应用人参皂甙Rg1干预自身免疫性脑脊髓炎小鼠的制备方法的条件建立，其特征是：

1)MOG35-55免疫诱导C57B1/6小鼠，建立EAE模型；

2)应用人参皂甙Rg1对EAE模型小鼠进行干预；

3)对生理盐水对照组和Rg1干预组小鼠进行临床表型的观察；

4)对生理盐水对照组和Rg1干预组小鼠进行病理组织学分析。

2、本发明的人参皂甙Rg1干预EAE的制备方法：

1)材料：人工合成MOG35-55肽链片段，不完全弗氏佐剂CFA，热灭活的结核分枝杆菌，百日咳毒素，人参皂甙Rg1单体，10-12周的C57B1/6小鼠；

2)步骤：

(1)乳化液的制备  按照每只老鼠100微升乳化剂配制，其中含有MOG35-55 300μg，MT 500μg；用1×PBS溶解适量的MOG 35-55，将其由Eppendorf管转移到5毫升的注射器内，取体积的CFA转移至另外一个5毫升的注射器，先由抗原端推向CFA端，进行乳化；

(2)小鼠麻醉  水合氯醛，3μl/g，小鼠腹腔注射；

(3)模型诱导  100μl/只乳化液，双腋下皮下注射；PT 200ng/只，尾静脉注射；

(4)Rg1干预组  诱导当日起，Rg1以10mg/Kg/日对EAE小鼠进行干预；

(5)生理盐水对照组  诱导当日起，生理盐水以与Rg1等体积的量，对EAE小鼠进行干预；

(6)EAE模型临床表型的观察：

    临床分级    临床表现    0    0.5    1.0    2.0    2.5    3.0    3.5    4.0    5.0    无症状    尾部部分无力    尾部瘫痪    共济失调，后肢轻瘫    单侧后肢的瘫痪    双后肢瘫痪    后肢瘫痪，伴有前肢无力    四肢瘫痪    死亡

(7)EAE发病高峰期，小鼠经水合氯醛麻醉后，取脑组织和颈膨大，腰膨大，4％的多聚甲醛固定，脱水，浸腊，固定，石蜡包埋，切片，HE染色。

3、根据权利要求2所述的制备方法，其特征是：所述的等体积的CFA是将IFA按照10μg/μl补充MT获得CFA。

4、根据权利要求2所述的制备方法，其特征是：所述的乳化过程中是连接管置于冰上，反复抽推直至阻力明显增大，取一滴乳化剂滴入水中，乳化剂呈现球形而不分散则说明乳化完全；出现平展扩散即为未乳化好，需要继续抽推进一步乳化。