[发明专利]海洋青霉菌抗肿瘤活性化合物及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种化合物，尤其是涉及一种源于帚状海洋青霉菌(Penicillium sp.)产生的海洋青霉菌抗肿瘤活性化合物及其制备方法与应用。

背景技术

海洋青霉菌(Penicillium sp.)分离于西太平洋近赤道区深海沉积物中，当采用马铃薯(PDA)培养基发酵时，其菌株生长良好，菌丝较长，呈深绿色，培养基内可见黑色素，产绿色孢子。在40倍荧光显微镜可见菌丝有横隔，分生孢子梗亦有横隔，分生孢子梗经过多次分枝，产生几轮对称或不对称的小梗，形如青霉的帚状体。采用rDNA基因间隔区(ITS regions)的测定方法，利用通用引物ITS4和ITS5对菌株ZhengRr-1的总DNA进行PCR扩增，测序，得到553bp的DNA片段，测序结果与genebank中登记的基因序列进行比较，找到与之具有最高相似度的是Penicillium sp.两者的基因序列有13个碱基的差别，相似度为97％，因此菌株ZhengRr-1鉴定为Penicillium sp.。

发明内容

本发明的目的在于提供一种结构新颖，尚未见报道的分离自海洋的青霉114ZhengRr-1(Penicillium sp.114 ZhengRr-1)代谢产生的化合物(2E，4E)-1-(2，6-二羟基-3，5-二甲基苯)-己-2，4-二烯-1-酮(简称为海洋青霉菌抗肿瘤活性化合物)及其制备方法。

本发明的另一目的在于将化合物(2E，4E)-1-(2，6-二羟基-3，5-二甲基苯)-己-2，4-二烯-1-酮用于制备抗肿瘤药物，作为抗氧化等生物活性的先导化合物。

本发明所述的青霉114ZhengRr-1(Penicillium sp.114 ZhengRr-1)已于2007年9月10日保藏于中国典型培养物保藏中心(中国武汉大学内)，保藏号为CCTCC NO：M 207142。

本发明所述的海洋青霉菌抗肿瘤活性化合物为(2E，4E)-1-(2，6-二羟基-3，5-二甲基苯)-己-2，4-二烯-1-酮，其分子式为C₁₄H₁₆O₃，结构式为：

其中，1～12，3a，5a为碳原子的编号，海洋青霉菌抗肿瘤活性化合物为白色粉末状固体，易溶于甲醇、丙酮等有机溶剂中。

本发明所述的海洋青霉菌抗肿瘤活性化合物的制备方法包括以下步骤：

1)固体培养及发酵产物的处理：取斜面菌种，接种到装有PDA培养基中进行固体培养，发酵结束后的固体发酵产物用浸提液乙酸乙酯∶甲醇∶乙酸＝80∶15∶5等体积浸提至少1次，将浸提液过滤，减压浓缩至干，得到褐色浸膏；

2)化合物分离：将上述褐色浸膏以水溶解，等体积乙酸乙酯浸提，反相硅胶柱分离，以甲醇和水洗脱，收集70％甲醇洗脱的组分，浓缩后用SephadexLH-20柱分离，甲醇洗脱，将收集的组分浓缩后以反相硅胶柱分离，收集50％丙酮+50％水的洗脱组分，浓缩后用硅胶分离，用石油醚∶乙酸乙酯进行梯度洗脱，当石油醚∶乙酸乙酯＝100∶1时，得到海洋青霉菌抗肿瘤活性化合物，即化合物(2E，4E)-1-(2，6-二羟基-3，5-二甲基苯)-己-2，4-二烯-1-酮。

检测时，荧光显暗红色，碘显色，硫酸显黄色，碘化铋钾显墨绿色，用石油醚∶乙酸乙酯溶剂系统2∶1展开时Rf值为0.58。

在步骤1)中，取斜面菌种，接种到装有PDA的培养基中进行固体培养，固体培养的温度最好为25～28℃，培养时间最好为10～14d。所述的浸提液可为乙酸乙酯∶甲醇∶乙酸＝80∶15∶5，每次浸提的时间可为12～24h，合并浸提液，减压浓缩可采用真空浓缩，真空浓缩的温度最好为40～45℃。

在步骤2)中，等体积乙酸乙酯浸提，反相硅胶柱分离可采用RP-18反相硅胶柱分离，以甲醇与水洗脱，按体积百分比，甲醇占甲醇与水总体积的30％～100％，洗脱的每个梯度为2000mL。将收集的组分浓缩后以RP-18反相硅胶柱分离，以50％丙酮+50％水和70％丙酮+30％水，各400ml洗脱。

本发明所述的海洋青霉菌抗肿瘤活性化合物是一种新颖的化合物，可在制备抗肿瘤药物，抗氧化或其它生物活性的先导化合物中应用。

具体实施方式

以下结合具体实施例进一步阐述本发明。

实施例1