[发明专利]一种抗虫转基因水稻多重PCR检测试剂盒及检测方法无效
| 申请号： | 200810063226.0 | 申请日： | 2008-07-23 |
| 公开（公告）号： | CN101343666A | 公开（公告）日： | 2009-01-14 |
| 发明（设计）人： | 王渭霞;傅强;赖凤香 | 申请（专利权）人： | 中国水稻研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 杭州天正专利事务所有限公司 | 代理人： | 黄美娟;冷红梅 |
| 地址： | 310006浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 转基因 水稻 多重 pcr 检测 试剂盒 方法 | ||
1.一种抗虫转基因水稻多重PCR检测试剂盒，主要包括下列引物：
CaMV-F：GCTCCTACAAATGCCATCA；
CaMV-R：GATAGTGGGATTGTGCGTCA；
Nos-F：CATGACGTTATTTATGAGATGGG；
Nos-R：GACACCGCGCGCGATAATTTATCC；
Bt-F：GAAGGTTTGAGCAATCTCTAC；
Bt-R：CGATCAGCCTAGTAAGGTCGT。
2.一种抗虫转基因水稻多重PCR检测试剂盒，其特征在于所述试剂盒中引物如下：
CaMV-F：GCTCCTACAAATGCCATCA；
CaMV-R：GATAGTGGGATTGTGCGTCA；
Nos-F：CATGACGTTATTTATGAGATGGG；
Nos-R：GACACCGCGCGCGATAATTTATCC；
Bt-F：GAAGGTTTGAGCAATCTCTAC；
Bt-R：CGATCAGCCTAGTAAGGTCGT；
Hpt-F：TAG GAG GGC GTG GAT ATG TC；
Hpt-R：TAC ACA GCC ATC GGT CCA GA。
3.一种抗虫转基因水稻多重PCR检测方法，包括：
(1)选取引物主要包括：
CaMV-F：GCTCCTACAAATGCCATCA；
CaMV-R：GATAGTGGGATTGTGCGTCA；
Nos-F：CATGACGTTATTTATGAGATGGG；
Nos-R：GACACCGCGCGCGATAATTTATCC；
Bt-F：GAAGGTTTGAGCAATCTCTAC；
Bt-R：CGATCAGCCTAGTAAGGTCGT；
(2)提取待检测水稻DNA，以待测水稻DNA为模板，在包括步骤(1)
所述引物的PCR反应体系中进行PCR反应；
所述PCR反应体系终浓度组成为：
PCR反应条件为：
94℃5min；94℃30s，退火温度58℃30s，72℃30s，35个循环；72℃3min；
(3)取PCR反应产物进行琼脂糖凝胶电泳，根据电泳结果是否出现特异性条带，判断待测水稻是否含存相应外源基因。
4.一种抗虫转基因水稻多重PCR检测方法，其特征在于所述方法如下：
(1)选取引物如下：
CaMV-F：GCTCCTACAAATGCCATCA；
CaMV-R：GATAGTGGGATTGTGCGTCA；
Nos-F：CATGACGTTATTTATGAGATGGG；
Nos-R：GACACCGCGCGCGATAATTTATCC；
Bt-F：GAAGGTTTGAGCAATCTCTAC；
Bt-R：CGATCAGCCTAGTAAGGTCGT；
Hpt-F：TAG GAG GGC GTG GAT ATG TC；
Hpt-R：TAC ACA GCC ATC GGT CCA GA；
(2)提取待检测水稻DNA，以待测水稻DNA为模板，在包括步骤(1)
所述引物的PCR反应体系中进行PCR反应；
所述PCR反应体系终浓度组成为：
PCR反应条件为：
94℃5min；94℃30s，退火温度60℃30s，72℃30s，35个循环；72℃3min；
(3)取PCR反应产物进行琼脂糖凝胶电泳，根据电泳结果是否出现特异性条带，判断待测水稻是否含有相应外源基因。
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