[发明专利]一种利用鞘氨醇单胞菌发酵萃取耦合制备辅酶Q10的方法

说明书

(一)技术领域

本发明涉及一种利用鞘氨醇单胞菌发酵萃取耦合制备辅酶Q₁₀的方 法，尤其是一种利用鞘氨醇单胞菌ZUTE03(CCTCC NO：M 207084)发 酵萃取耦合制备辅酶Q₁₀的方法。

(二)背景技术

辅酶Q₁₀(CoenzymeQ₁₀，CoQ₁₀)广泛存在于动物、植物及微生物体 内，是生物细胞呼吸链中重要的递氢体，也是一种良好的生化药物(Nazzal S，Nutan M，Palamakulaa，et al.Optiimization of a self-nanoemulsified tablet dosage form of Ubiquinone using response surface methodology. International Journal of Pharmaceutics，2002，240：103-114.)。它具有抗氧化 性、消除自由基、提高机体免疫力等功能(Ernster L.Facts and ideas about the function of coenzyme Q₁₀ in the Mitochondria.Elservier Amsterdam.1977， 23：15-18.)，已广泛应用于各类心脏病、糖尿病、癌症、急慢性肝炎、帕 金森症等疾病的治疗。(Jin-Ho Choi，Yeon-Woo Ryu，Jin-Ho Seo，et al. Biotechnological production and applications of Coenzyme Q₁₀.Appl Microbiol Biotechnol，2005，68：9-15.)最近，研究者发现辅酶Q₁₀具有抗衰 老作用，从而将其应用扩展到化妆品和保健品领域，使其在国内外的需求 进一步扩大。(张延静，袁其朋，梁浩，等.产辅酶Q₁₀酵母的发酵条件研究. 微生物学通报，2003，30(2)：65-69.)另外，近年来科学研究表明，辅酶Q₁₀对感染HIV的病人亦有辅助治疗的功效，目前这方面的应用正处于II期临 床阶段(姜传福.辅酶Q₁₀的制备及其药物功能.石油化工高等学校学报. 2005，18(4)：52-81.)。

制备辅酶Q₁₀的方法主要有动物细胞提取法、烟叶茄呢醇半合成法、 完全合成法、微生物发酵法或植物细胞培养法(王青云，王发祥，钟士清，等. 微生物发酵生产辅酶Q₁₀的研究进展.化学与生物工程，2006，23(8)： 11-13.)。与其他方法相比，微生物发酵法具有产物活性高、原料成本低、 易控制及可实现大规模生产等特点(Meganathan R.Ubiquinone biosynthesis in microorganisms.FEMS Microbiology Letters，2001， 203：131-139.)。

通过发酵收集到菌体后大致通过下面两种方法来提取辅酶Q₁₀。(1) 不经皂化的提取分离方法：将菌体破碎后直接用丙酮或沸腾酒精抽提，后 用石油醚萃取多次，再用水或甲醇洗去极性物质，经硅胶柱纯化。(2)醇 碱或碱皂化提取法：用醇碱先皂化后用石油醚或正已烷回流提取，水洗后 同样经硅胶柱纯化(韩少英，窦  洁，周长林.发酵法生产辅酶Q₁₀的研究 进展.药物生物技术，2006，13(3)：227-232.)。同直接提取法相比，皂化后 提取法得到的提取物量较多，但辅酶Q₁₀容易被破坏且步骤烦琐，费时费 力，且提取溶剂损耗较大。

(三)发明内容

本发明即是为了对现有发酵提取工艺进行简化和优化，提供一种萃取 溶剂回收率高、方法简便、辅酶Q₁₀收率高的利用鞘氨醇单胞菌发酵萃取 耦合制备辅酶Q₁₀的方法。

本发明采用的技术方案是：