[发明专利]胎盘间充质干细胞分离和体外扩增培养方法

权利要求书

1.一种胎盘间充质干细胞分离和体外扩增培养方法，通过以下方案实现：

取胎盘母体侧蜕膜，剪碎后用0.1％IV型胶原酶消化并收集细胞，以含10％胎牛血清的DMEM培养基和2mML-谷氨酰胺进行贴壁培养，再行负、正向免疫分选结合的方法纯化胎盘间充质干细胞，获得CD34^-CD105⁺细胞，再在体外无血清培养体系中继代扩增培养，其中所述负向纯化是行阴性免疫筛选，所述正向纯化是行阳性免疫筛选，所述无血清体外培养体系含有无血清培养基和成纤维细胞生长因子-2。

2.根据权利要求1所述的一种胎盘间充质干细胞分离和体外扩增培养方法，其特征是：所述无血清培养基含有DMEM/F12培养液、L-谷氨酰胺、β-巯基乙醇和非必需氨基酸，其组成比例为DMEM/F12培养液∶1mM L-谷氨酰胺∶0.1mM β-巯基乙醇∶1％非必需氨基酸，无血清培养基与成纤维细胞生长因子-2的比例为1∶5ng/ml。

3.根据权利要求1所述的一种胎盘间充质干细胞分离和体外扩增培养方法，其特征是：所述的阴性免疫筛选是采用CD34标记磁珠分选，获得CD34^-细胞。

4.根据权利要求1所述的一种胎盘间充质干细胞分离和体外扩增培养方法，其特征是：所用的阳性免疫筛选是采用CD105标记磁珠分选，获得CD34^-CD105⁺细胞。

5.根据权利要求1所述的一种胎盘间充质干细胞分离和体外扩增培养方法在纯化胎盘间充质干细胞中应用。

6.根据权利要求1所述的一种胎盘间充质干细胞分离和体外扩增培养方法在胎盘间充质干细胞体外扩增培养中应用。