[发明专利]一种重组猪源抗菌肽PG4及其生物合成方法与应用

权利要求书

1、一种重组猪源抗菌肽PG4，其特征在于：所述PG4的氨基酸序列为具有SEQ ID NO：1中所示的氨基酸序列。

2、一种合成如权利要求1所述的重组猪源抗菌肽PG4的方法，其特征在于依次包括以下步骤：

(1)将合成的低聚核苷酸经退火处理成为双螺旋的目的DNA单体，应用DNA重组技术，构建抗菌肽PG4原核表达载体；

(2)抗菌肽PG4原核表达载体转化大肠杆菌宿主细胞，构建表达工程菌；

(3)发酵培养工程菌，进行诱导剂诱导表达；

(4)将步骤(3)所得表达产物经亲和层析纯化、溴化氰化学切割，再纯化后得到重组猪源抗菌肽PG4。

3、根据权利要求2所述的重组猪源抗菌肽PG4的合成方法，其特征在于：步骤(1)所述的低聚核苷酸为：

PG4-1：

5’-ATTCAGGGATCCATGCGCGGTGGCCGTCTGTGCTATTGTCGCGGTTGGATCTGCTTCTGTGTGGGTCGTTAAAAGCTTAATTCG-3’；

PG4-2：

5’-CGAATTAAGCTTTTAACGACCCACACAGAAGCAGATCCAACCGCGACAATAGCACAGACGGCCACCGCGCATGGATCCCTGAAT-3’。

4、根据权利要求2或3所述的重组猪源抗菌肽PG4的合成方法，其特征在于：步骤(1)具体是将目的基因DNA片段和表达载体进行BamH I和HindIII双酶切，酶切产物经琼脂糖凝胶电泳后，切胶回收纯化目的片段，经T4 DNA连接酶连接，构建重组抗菌肽PG4原核表达载体，所用原核表达载体为pGEX-2TK-CMS。

5、根据权利要求2所述的重组猪源抗菌肽PG4的合成方法，其特征在于：步骤(2)具体是将步骤(1)构建的抗菌肽PG4原核表达载体经BamHI和HindIII双酶切，酶切产物经琼脂糖凝胶电泳验证正确，转化入大肠杆菌宿主细胞，构建表达工程菌。

6、根据权利要求2所述的重组猪源抗菌肽PG4的合成方法，其特征在于：步骤(3)具体是用TB培养基、25～37℃(最佳温度37℃)发酵培养表达工程菌1.5～4h(最佳时间2.5h)至OD₆₀₀达到0.4～1.0；加入IPTG诱导剂至终浓度为0.01～1mM(最佳浓度为0.1mM)，诱导培养2～5h。

7、根据权利要求2所述的重组猪源抗菌肽PG4的合成方法，其特征在于：步骤(4)包括收集步骤(3)诱导后工程菌，经超声破碎后离心，得上清液；亲和层析的分离介质为GSH-Sepharose Resin，用10倍柱体积的pH7.4的PBS缓冲液平衡层析柱，上样，Wash buffer洗树脂，Elution buffer洗脱，收集洗脱液，得重组猪源抗菌肽PG4。

8、一种如权利要求1或2所述的基因重组猪源抗菌肽PG4在抗菌药物及生物抗菌材料中的应用。