[发明专利]一种利用溶剂沉淀提取并纯化红杉醇的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种从红豆杉等植物原料中提取红杉醇的方法，具体的是一种利用溶剂沉淀提取并纯化红杉醇的方法。

背景技术

红豆杉具有极高药用价值，但除了抗癌的作用被开发利用外，其它方面的作用的开发还远不够，大量的红豆杉除了用于生产紫杉醇、10-DAB等紫杉烷类化合物外，其中的其它功效成分基本上没有被利用，造成资源浪费。

红杉醇是从红豆杉提取的一种治疗糖尿病的有效成分，英文名：Sequoyitol化学名：5-0-methyl-myoinositol(或5-氧-甲基-内消旋肌醇)分子式：C₇H₁₄O₆分子量：194.20其化学结构如下：

其在红豆杉皮、枝、叶均含有，含量大约为0.1-0.2％。

中国专利文献公开了上海百灵医药科技有限公司杨继东等申请的“一种提取与纯化红杉醇的方法”(CN1994995)、广州威尔曼新药开发中心有限公司孙明杰等申请的“用于糖尿病预防和治疗的红杉醇和红杉醇植物提取物”(CN1706369)、中国药科大学梁敬钰等申请的“一种防治糖尿病的植物提取物及其制备方法与药物用途”(CN1488344)。

经过临床的生物实验表明，红杉醇降血糖的效果十分明显，而且作用机理和目前上市的治疗糖尿病的药物不一样，它可以把糖尿病人身体内被破坏的胰岛系统恢复，有望被开发成治愈糖尿病的药物。作为一种天然产物，红杉醇的提取纯化存在许多问题：1、红杉醇在原料中和普通的天然产物相比含量低，不同植株、不同部位的含量差异较大。2、原料中和红杉醇结构相似的杂质、异构体较多，水溶性好，极性大，不利用常规的分离手段，分离纯化难度大。3、在分离过程中不易用薄层色谱、紫外等监控手段控制分离纯化过程，增加了分离纯化难度。4、现有的红杉醇提取纯化工艺成本高，纯度低，得率低。随着红杉醇市场需求的不断扩大，工业化规模的分离技术日益受到重视，提取纯化工艺的经济性问题倍受关注。

发明内容：

本发明的目的在于提出一种溶剂沉淀提取并纯化红杉醇的方法。该方法可有效保证提取的红杉醇质量及纯度，且得率高，成本低。

本发明的技术方案为：一种利用溶剂沉淀提取并纯化红杉醇的方法，具体如下：

(1)、将红豆杉原料进行粉碎至粒径为至少20目；

(2)、制红豆杉浓缩提取物

用提取溶剂对原料进行提取，提取溶剂为低级醇、丙酮、乙腈及其含水溶剂中至少一种，含水溶剂为含水10-50％的低级醇、丙酮、乙腈溶液；料液比为：原料∶提取溶剂＝1∶3-5(w/w)，≤80℃下浓缩，得红豆杉浓缩提取物；

(3)、红杉醇干浓缩物

红豆杉浓缩提取物，≤80℃下，浓缩，搅拌红豆杉浓缩提取物，加入5-10倍量(W/W)的乙醇、丙酮中至少一种，静置，沉淀，收集固形物或沉淀，干燥得红豆杉干浓缩物；

(4)、制红杉醇粗品

干浓缩物每次加入3-5(w/w)倍量甲醇作回流提取溶剂进行回流提取，至少2次，收集回流提取液，搅拌，在回流提取液中加入0.5-2(v/v)倍量加入沉淀溶剂，冷却，静置，收集沉淀得红杉醇粗品，所述的沉淀溶剂为低级酮、三氯甲烷、二氯甲烷及乙酸乙脂溶剂的其中之一；

(5)、制红杉醇晶体

红杉醇粗品加入3-8(w/w)倍量的甲醇作溶解剂进行回流溶解，过滤，收集回流液，浓缩，冷却，静置，(-5)-(5)℃低温结晶，结晶完全后过滤，收集晶体；

(6)、制高纯度红杉醇

红杉醇晶体加入2-5(w/w)倍量的水加热至60-80℃搅拌至晶体溶解，加入1-2(v/v)倍量低级醇、丙酮、乙腈，搅拌均匀，80℃保温10-20分钟，静置，冷却至(-5)-(5)℃低温结晶，过滤，收集晶体，至少重复结晶3次，红杉醇晶体，干燥，取样按检测方法进行HPLC检测，得含量≥99％红杉醇高纯品。

所述的红豆杉为中国红豆杉(Taxus chinensis)，东北红豆杉(T.cuspidata)，云南红豆杉(T.yunnanensis)，西藏红豆杉(T.wallichiana)，欧洲红豆杉(T.baccata)，短叶红豆杉(T.brevifolia)，加拿大红豆杉(T.canadensis)，佛罗里达红豆杉(T.floridana)和直立杂种红豆杉(T.media，T.speciosa，T.fastigiata)，红豆杉原料为红豆杉枝、叶、树皮、木质、根。

其中步骤(2)、(6)中所采用的低级醇为甲醇、乙醇、丙醇或异丙醇；步骤(4)中所采用的低级酮为丙酮、丁酮。