[发明专利]农杆菌介导木本植物叶芽原位基因转化方法有效
| 申请号： | 200810054542.1 | 申请日： | 2008-02-04 |
| 公开（公告）号： | CN101225384A | 公开（公告）日： | 2008-07-23 |
| 发明（设计）人： | 孙毅;杨利艳;谢莉琴;张一萍 | 申请（专利权）人： | 山西省农业生物技术研究中心 |
| 主分类号： | C12N15/11 | 分类号： | C12N15/11;C12N15/84;A01H1/00 |
| 代理公司： | 太原市科瑞达专利代理有限公司 | 代理人： | 刘宝贤 |
| 地址： | 030031*** | 国省代码： | 山西;14 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 杆菌 木本植物 叶芽 原位 基因 转化 方法 | ||
1.一种农杆菌介导木本植物母体叶芽基因转化方法，其特征是以木本植物叶芽为受体，以携带外源基因片段的农杆菌Ti质粒为基因载体，在叶芽刚萌动时划伤生长点，并对划伤部位进行农杆菌侵染及保湿处理，将外源基因转移到受体基因组中，通过抗生素筛选、PCR扩增及Southern杂交，筛选阳性枝条，然后对阳性材料进行扦插繁殖。
2.根据权利要求1所述的农杆菌介导木本植物母体叶芽基因转化方法，其特征是对杨树叶芽进行基因转化。
3.根据权利要求1所述的农杆菌介导木本植物母体叶芽基因转化方法，其特征是选刚萌动的杨树顶芽和侧芽，叶芽表面光滑，尚无绿叶出现时进行处理。
4.根据权利要求1所述的农杆菌介导木本植物母体叶芽基因转化方法，其特征是对刚萌动的叶芽用锋利的刀片纵向划伤生长锥。
5.根据权利要求1所述的农杆菌介导木本植物母体叶芽基因转化方法，其特征是将携带外源基因片段的农杆菌在叶芽处理的前一天进行培养，从平板上挑取单菌落于加有卡那霉素(50mg/ml)的YP(yeast peptone)液体培养基中进行振荡培养，调节农杆菌悬浮液OD值至0.1-1.0，将其滴到幼芽伤口处，然后用封口膜包裹被处理后的叶芽保湿，2-3天后去膜。
6.根据权利要求1所述的农杆菌介导木本植物母体叶芽基因转化方法，其特征是当受体为非农杆菌宿主或单子叶植物叶芽时，在农杆菌悬浮液中加入乙酰丁香酮作为农杆菌侵染诱导物。
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