[发明专利]运用PCR引物检测雀麦上雀麦腥黑粉菌的方法

说明书

技术领域

本发明涉及使用PCR技术检测寄生于禾本科草种雀麦(Bromus)中雀麦腥黑粉菌(Tilletiabromi)的方法。属于禾本科草种腥黑粉菌检测领域。

背景技术

雀麦属(Bromus spp.)是一年生或多年生草本，多为优良饲料植物，广布于地球北部温带地区。其中无芒雀麦(B.inermis L)在中国广泛分布于东北、华北、西北等地，叶量大，适口性好，营养丰富，各种家畜均喜食；具发达根茎，生长快、再生性强、耐杂草、耐践踏，是适于草地补播、建立长期草地的优质高产牧草，也是我国温带和寒温带地区建立人工和半人工草地的当家草种；对气候的适应性很强，良好的抗旱性、耐热性和抗寒性，能忍耐最低气温-48℃，是最抗寒、最适于寒冷干燥地区种植的牧草品种之一(王博.无芒雀麦.现代农业，2004，4：24.)；耐盐碱能力强，耐水淹，在疏松瘠薄的砂土和碱土上也能生长，是固土固沙的先锋植物，一般用做公路绿化和水土保持[罗富成，伙秀丽.无芒雀麦在草坪绿地中的应用价值研究.云南农业大学学报，2004，19(5)：589-591.]。雀麦(B.japonicus)为一年生草本，根系发达，适应性强，在红壤、棕壤、砂砾土、冲积土和粘土均能生长，也是一种很好的牧草和保土植物(王栋原著，任继周等修订.牧草学各论，新一版，江苏科学技术出版社，1989，17.)。

雀麦腥黑粉菌(Tilletia bromi)是雀麦属穗部的重要病害，严重影响雀麦的产量和品质。Boyd和Carries从寄主专化性、分子生物学及细胞学三方面阐述了侵染乌尔披草属(Vulpiaspp.)的专化型和侵染雀麦属(Bromi spp.)的专化型的不同，将综合种T.fusca分为两个独立的种，即侵染Vulpia的T.fusca和侵染Bromus的T.bromi[Boyd M L and Carris L M.1997.Molecular relationships among varieties of the Tilletia fusca(T.bromi)complex and related species.Mycol.Res.101：269-277；Boyd M L and Carris L M.1998.Evidence supporting the separation ofthe Vulpia-and Bromus-infecting isolates in the Tilletia fusca(T.bromi)complex.Mycologia，90(6)：1031-1039.]。根据Fisher & Duran(Duran R and Fischer G W.1961.The Genus Tilletia.Washington State University，Pullman Press)、Vanky(Vanky.1994.European smut fungi.GustavFisher Verlag；Stuttgart)和Matsumoto(Matsumoto T and Bell T.1989.Laboratory guideidentification of fungi quarantine significance California-Smut fungi)的观点，侵染雀麦的网状腥黑粉菌有4种，分别是小麦矮腥黑穗菌(T.controversa，简称TCK)、雀麦腥黑粉菌(T.bromi)、T.bolayi和小麦网腥黑穗菌(T.caries，简称TCT)。T.bolayi冬孢子堆棕黑色条状，存在于植株叶片上，不侵染子房，并且，冬孢子呈多角不规则形，与T.bromi、TCT、TCK易于区别，而T.bromi、TCT、TCK以及T.fusca四者冬孢子形态和萌发生理非常类似，1994年，Boyd和Carries曾报道T.bromi和TCK担孢子可以互相融合(Carris，L M and Gray P M.1994.Theability of Tilletia fusca to hybridize with the wheat bunt species under axenic conditions.Mycologia，86：157-163)。T.bromi从形态和萌发生理与TCK极为相似。