[发明专利]运用PCR引物检测雀麦上雀麦腥黑粉菌的方法

权利要求书

1.一种运用PCR引物检测雀麦上雀麦腥黑粉菌的方法，其特征在于，所设计的引物和用途如下：

(1)设计腥黑粉菌属通用引物，序列如下：

通用外套引物：IGSUF1：GGA TGC ATT CTG GGG ACG T

              IGSUR1：GTA GCC TTG TTG CTA CGA TCT G

通用内套引物：NIGSUF1：CAC CGC CCA AGC ACG TAC

              NIGSUR1：GAC CTT TTG GGG TCA AAC TTC TC

通用外套引物用于腥黑粉菌属菌丝基因组DNA或冬孢子套式扩增，通用内套引物用于冬孢子的套式扩增，这两套引物用于腥黑粉菌属扩增过程质量监测，检查所抽提的菌丝基因组DNA质量和冬孢子的挑取和破碎，避免检测过程中的假阴性；

(2)设计雀麦腥黑粉菌区别于小麦矮腥黑穗菌、小麦网腥黑穗菌和禾草腥黑粉菌的特异引物以及外套引物，序列如下：

外套引物：tubkF1：GCT CTT CGA GAC GTA CCT

          tubkR1：GGC AAA CAT GAC GGG AAA TC

特异引物：BBSF：GGT GGC AAA CAT GGC CAT T

          BBSR：CTC AAA CAT GGC AAA TC

特异引物用于雀麦腥黑粉菌菌丝基因组DNA常规PCR，外套引物与特异引物套式扩增冬孢子DNA。

2.一种运用PCR引物检测雀麦上雀麦腥黑粉菌的方法，其特征在于，它包括如下步骤：

(1)实验材料冬孢子的萌发和菌丝的培养；

(2)菌丝基因组DNA的提取；

(3)冬孢子的挑取与破碎；

(4)建立腥黑粉菌属和雀麦腥黑粉菌菌丝基因组DNA的常规PCR检测方法，

通用引物序列如下：

通用外套引物：IGSUF1：GGA TGC ATT CTG GGG ACG T

              IGSUR1：GTA GCC TTG TTG CTA CGA TCT G

通用内套引物：NIGSUF1：CAC CGC CCA AGC ACG TAC

              NIGSUR1：GAC CTT TTG GGG TCA AAC TTC TC

(5)建立腥黑粉菌属和雀麦腥黑粉菌冬孢子的套式PCR检测方法，

套式引物序列如下：

外套引物：tubkF1：GCT CTT CGA GAC GTA CCT

          tubkR1：GGC AAA CAT GAC GGG AAA TC

特异引物：BBSF：GGT GGC AAA CAT GGC CAT T

          BBSR：CTC AAA CAT GGC AAA TC。