[发明专利]叶酸受体介导靶向乙酰普鲁兰多糖纳米粒及制备方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种叶酸受体介导靶向乙酰普鲁兰多糖及其纳米粒及制备方法，即将亲水性普鲁兰多糖进行乙酰化疏水改性，再与叶酸交联形成叶酸-乙酰普鲁兰多糖偶合物，以及该聚合物为载体的载药纳米粒和制备方法及其体外对肿瘤细胞的作用。

背景技术：

药物传递系统(drug delivery system，DDS)是国内外医药领域的重要研究方向，特别是与抗癌药物组成的纳米控缓释系统，将药物转变成稳定的纳米粒子，其突出优点是纳米微粒体积小，可在血液中自由运行，具有穿过靶组织内皮细胞的能力，可被肿瘤细胞摄取进入细胞内，将所包含的化疗药物在细胞和/或亚细胞水平释放，大大提高药物疗效，还可提高难溶性药物的溶解性，增加药物与胃肠道液体的有效接触面积，有利于提高药物利用率，提高药效。

作为药物载体天然高分子材料逐渐受到关注，特别是天然多糖如壳聚糖、葡聚糖、普鲁兰多糖等，其生物相容性好、毒性低，并具有纳米粒载体表面的修饰功能，能明显延长药物在体内的保留时间，减少吞噬细胞的吞噬，增加药物疗效。其中普鲁兰多糖(Pullulan，Pul)是出芽孢梗霉产生的胞外多糖，以α-1，6糖苷键结合麦芽糖构成同型多糖为主，即葡萄糖按α-1，4糖苷键结合成麦芽三糖，两端再以α-1，6糖苷键同另外的麦芽三糖结合，如此反复连接而成高分子多糖。该物质无毒，无致突变作用，无色无味，可以食用，具有良好的生物相容性，能够被体内淀粉酶降解，是一种良好的药物载体材料。研究表明，普鲁兰多糖能够与肝细胞表面的半乳糖受体结合，可为药物肝脏靶向提供新材料(Kaneo Y.et al：JControl Rel，2001，70：365-373)。但是，由于普鲁兰多糖的水溶性极强，制备纳米粒过程较复杂，对疏水性药物的包载有一定限制。近年来，合成的疏水改性普鲁兰多糖衍生物作为药物载体已广泛用于多种化学药物、蛋白药物和基因药物的传递系统(Rekha MR，et al：Trends Biomater Artif Organs，2007，20：116-121)。此外，为提高载体系统的靶向传递效果通常通过化学修饰等方法将载体与配体相连及与特异受体介导载体的传递来实现。在受体介导的药物传递系统中，叶酸受体是比较重要的受体之一。研究表明，叶酸受体在一些上皮细胞系肿瘤，如卵巢癌、肾癌、子宫癌、睾丸癌、脑瘤、结肠癌、肺腺癌及乳腺癌、脑瘤、睾丸癌、头颈部肿瘤、粒系白血病等高水平表达，在正常组织低水平表达。研究结果证明，叶酸受体介导的传递系统主要针对肿瘤细胞可以实现高表达，在抗肿瘤的治疗中叶酸由于无害、免疫原性弱、稳定及与叶酸受体的结合力强对肿瘤有高度的选择性而成为新一代靶向剂。

叶酸作为叶酸受体的配体与放射性核素直接或间接连接形成的复合物在肿瘤影像诊断方面的动物实验结果表明，肿瘤部位靶向效果显著(Carla JM et al：Bioconjugate Chem，2000，11，253-257)。叶酸间接与脂质体表面结合生成的叶酸-PEG-脂质体细胞培养结果表明，其靶向肿瘤细胞效果明显好于PEG-脂质体或普通脂质体(Lee et al：J Biol Chem，1994，269：3198；Biochim Biophys Acta 1995，1233：134)；叶酸间接与高分子物质偶联制成载药纳米胶束可显著增强对肿瘤细胞的毒性(Yoo HS，et al：J Control Rel，2004，100：247-256；Wang YZ，et al：2001，337：63-73)。但是，迄今为止，叶酸与乙酰普鲁兰多糖偶合物，通过溶剂扩散法制备纳米粒作为抗肿瘤药物载体的研究尚未见任何文献或专利报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种叶酸受体介导靶向乙酰普鲁兰多糖纳米粒及制备方法和应用。本发明是一种新型，价廉易得，可大量制备的纳米载体，并可提高纳米载体的靶向性，降低抗肿瘤药物的毒副作用，克服现有载体的一些不足。

本发明提供的一种叶酸受体介导靶向乙酰普鲁兰多糖纳米粒，其组成为：A-X-Y，其中：A是疏水基团乙酰基；X是水溶性多糖普鲁兰；Y是叶酸及其衍生物。

所述的叶酸及其衍生物是叶酸、亚叶酸、二氢叶酸或四氢叶酸。

本发明所涉及的水溶性多糖是普鲁兰多糖，其对动物或人体肿瘤细胞或肿瘤组织生长无明显直接抑制活性，本身也不具备受体的配体性质。分子量范围为4,000～2000,000。

本发明提供的一种叶酸受体介导靶向乙酰普鲁兰多糖纳米粒包括的步骤：

一、乙酰化普鲁兰多糖的合成