[发明专利]叶酸受体介导靶向乙酰普鲁兰多糖纳米粒及制备方法

权利要求书

1、一种叶酸受体介导靶向乙酰普鲁兰多糖纳米粒，其特征在于它的组成为：A-X-Y，其中：A是乙酰基团；X是普鲁兰多糖；Y是叶酸及其衍生物。

2、按权利要求1所述叶酸受体介导靶向乙酰普鲁兰多糖纳米粒，其特征在于所述的叶酸及其衍生物是叶酸、亚叶酸、二氢叶酸或四氢叶酸。

3、按权利要求1所述叶酸受体介导靶向乙酰普鲁兰多糖纳米粒，其特征在于所述的普鲁兰多糖分子量范围为4,000～2,000,000。

4、权利要求1所述叶酸受体介导靶向乙酰普鲁兰多糖纳米粒的制备方法，其特征在于包括的步骤：

一、普鲁兰多糖的乙酰化改性

1)将普鲁兰多糖在25～54℃、搅拌下溶解于甲酰胺中，加入酸酐，在吡啶存在下反应3～48h；

2)反应产物中加入水使产物沉淀；

3)将反应物沉淀分别用水和甲醇反复洗涤，干燥；

二、叶酸偶联乙酰普鲁兰多糖的合成

1)叶酸羰基的活化：将叶酸类化合物溶解于有机溶剂二甲基亚砜中，与亚胺类活化剂进行活化反应，反应温度为5～40℃，反应时间为0.5～3小时；

所说的亚胺类活化剂选自：1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N，N’-二环己基碳二亚胺；或N，N’-二异丙基碳二亚胺；

亚胺类活化剂的重量用量为叶酸类化合物的50～70％；

2)叶酸类化合物与乙酰普鲁兰多糖偶联

将叶酸类化合物与乙酰普鲁兰溶液在催化剂4-二甲氨基吡啶和碳化二亚胺类脱水剂作用下反应，反应温度为5～40℃，反应时间为3～5天，使生成叶酸偶联乙酰普鲁兰多糖，将反应中生成的1，3-二环己基脲沉淀过滤除掉，反应液滴加入过量甲醇中沉淀，3000rpm离心，收集沉淀，用甲醇反复洗至上清液中无黄色；真空干燥或冻干，得黄色粉末。

所述的乙酰普鲁兰多糖溶液为溶解于二甲基亚砜中的溶液；

所述的乙酰普鲁兰多糖∶叶酸类化合物∶DCC∶DMAP＝1∶0.3～0.8∶0.36～1.5∶0.17～0.6，摩尔比；

三、溶剂扩散法制备叶酸偶联乙酰普鲁兰纳米粒

1)叶酸偶联乙酰普鲁兰完全溶解于与水混溶的有机溶剂中，搅拌下用注射器将有机相缓慢注入水溶液，随着有机溶剂在水中扩散，逐渐形成有乳光的纳米悬液；

有机溶剂为二甲基甲酰胺或二甲基亚飒；

所述水相为含有表面活性剂聚乙烯醇的水溶液，PVA溶液的浓度为：0.5％～2％；有机相∶水相＝1∶5～20(体积比)；

叶酸偶联乙酰普鲁兰在有机溶剂中质量浓度为0.1～0.2％；

注射器针头型号为4～6号；

搅拌转速为300～600rpm；

2)将纳米悬液在高速离心机中以15000～20 000rpm离心，以除去有机溶剂及PVA；然后将沉淀用吸管在水中吹打分散，3000rpm离心，将沉淀重新分散，即得纳米悬液。

5、一种叶酸受体介导靶向乙酰普鲁兰多糖包载药物纳米粒，其特征在于它是以叶酸偶联乙酰普鲁兰多糖纳米粒为载体，包埋抗肿瘤药物；

所述的抗肿瘤药物与叶酸偶联乙酰普鲁兰纳米粒质量比为：1～10∶50。

6、权利要求5所述的包载药物纳米粒的制备方法，其特征在于将药物与载体材料于能和水混溶的有机溶剂中，搅拌下注入水相，18000rpm超速离心，分离游离药物、表面活性剂PVA及有机溶剂，将纳米粒沉淀重新分散于水中形成纳米悬液。

7、按权利要求6所述的制备方法，其特征在于所述的有机溶剂为N，N-二甲基甲酰胺或二甲基亚砜。

8、按权利要求6所述的制备方法，其特征在于所述的水相为0.4～2％的聚乙烯醇溶液。

9、按权利要求6所述的制备方法，其特征在于所述的抗肿瘤药物为：表阿霉素、阿霉素、柔红霉素、全反式维甲酸、紫杉醇、甲氨蝶呤、喜树碱。

10、按权利要求6所述的制备方法，其特征在于所述的载体的浓度为5～20mg/ml；所述的药物浓度为5mg/ml，体积比为：1∶0.1～0.4；搅拌下用注射器注入上述水相中得到纳米悬液；将纳米悬液在高速离心机中以15 000～20 000rpm离心，以除去游离药物，有机溶剂及PVA；然后将沉淀用PBS或培养基用吸管吹打，重新分散；3000rpm离心20分钟，将沉淀重新分散，可得到载药纳米悬液。