[发明专利]六味地黄丸双波长覆盖融合指纹图谱的质量控制方法

说明书

发明领域

本发明属于采用现代分析检测仪器检测中药制剂技术领域，涉及一种中药质量的控制方法，更具体的说是一种六味地黄丸双波长覆盖融合指纹图谱的质量控制方法。

背景技术

六味地黄丸是中医补益剂中滋补肾阴的代表方剂。其配方源自经典古方，由熟地黄、山茱萸(制)、牡丹皮、泽泻、山药、茯苓6味药材组成，具有滋阴补肾的主要功能。其立法以肾、肝、脾三阴并补，补肾为主。熟地黄滋补肾阴、填精益髓为主药；山茱萸药性酸温，可补益肝肾，涩精敛汗；山药味甘性平，健脾补肺，固肾益精。而泽泻配熟地黄则泻肾降浊；牡丹皮配山茱萸以清泻肝火；茯苓配山药渗水利湿。配伍组方以补为主，并将补虚与去邪结合，形成“三补三泻”，相反相成之势，适合于肝肾阴虚之症。主治由肾阴亏虚引起的腰膝酸软、头晕目眩、耳鸣耳聋、潮热盗汗、口燥咽干、骨蒸潮热，盗汗遗精，消渴等症状。近年来研究发现六味地黄丸还有许多新功效。如提高实验动物降低的脾脏白细胞介素2活性，拮抗使用醋酸可的松造成的脾脏重量减轻。进一步研究还发现，六味地黄丸对多形核白细胞的免疫功能有明显的双向调节作用，且具有一定的防癌作用；对肾功能的影响研究发现，服用六味地黄丸的大鼠其细胞生成溶酶体的速度明显加快，从而提高了细胞的解毒能力而改善肾功能；延缓衰老，六味地黄丸能明显增加阴虚动物体重，增强其抗疲劳、耐低温和耐缺氧能力。有明显的抗氧化作用，对老年性痴呆有一定治疗作用。

随着科学技术的发展，现代分析检测仪器的普及应用，使中药检测分析水平有了显著提高，药品质量控制方法不断完善。其中指纹图谱技术在中药质量控制中发挥越来越重要作用。它是采用光谱、色谱等分析手段对中药材(或中成药)的成分进行检测，形成特有的专属化学图谱，该图谱能全面反映中药所含内在化学成分的种类与数量，具有相对唯一性，故称之为中药材(或中成药)的指纹图谱。中药指纹图谱由于体现了中医药的整体、宏观、复杂的特点很快成为国内外广泛接受的中药质量控制方法。

六味地黄丸在中药制剂中占有很重要的地位。目前，市场销售有很多厂家生产的六味地黄丸，其质量良莠不齐，因而六味地黄丸的稳定性难以保证。2005版中国药典规定的含量测定：牡丹皮中含丹皮酚(C₉H₁₀O₃)计，水蜜丸每1g不得少于1.0mg；小蜜丸每1g不得少于0.70mg；大蜜丸每丸不得少于6.3mg。含山茱萸以马钱苷(C₁₇H₂₆O₁₀)计，水蜜丸每1g不得少于0.70mg；小蜜丸每1g不得少于0.5mg；大蜜丸每丸不得少于4.5mg。采用此标准测定牡丹皮中的丹皮酚和山茱萸中马钱苷作为含量质量控制标准是在两个不同波长下，使用不同的前处理方法分别进行测定；此方法不能从整体上评价和控制的中药质量，且药典中马钱苷测定方法流动相体系和前处理均较复杂。

发明内容

本发明目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种六味地黄的新指纹图谱，及基于其指纹图谱的双波长覆盖融合的含量测定方法，以保证六味地黄药物的质量更加安全、可靠。

本发明是通过以下技术方案实现的：

六味地黄丸双波长覆盖融合指纹图谱的质量控制方法，其特征在于该方法按如下步骤进行：

(1)供试品溶液的制备：取本品六味地黄丸切碎，取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，称定重量，超声提取60～120分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

(2)对照品溶液的制备：精密称取马钱苷对照品、丹皮酚对照品适量，加甲醇分别制成每1mL含马钱苷对照品14μg、丹皮酚对照品18μg的溶液，即得；

(3)测定方法：照高效液相色谱条件(中国药典2005版一部附录VID)测定。色谱条件和系统适用性试验，色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂：Agilent  SB C₁₈(4.6mm×250mm，5μm)；流动相梯度见表1；流速1.0mL/min；检测波长236 nm、274nm；进样量10μL，理论塔板数计算，应不低于3000；

表1流动相梯度洗脱表