[发明专利]一种GHGKHKNK八肽的制备工艺及医药用途

说明书

技术领域

本发明提供一种GHGKHKNK八肽的制备工艺，本发明还公开了其在抗肿瘤转移方面的医药用途，属于生物化学中的多肽药物技术领域。

背景技术

近年来，随着研究的深入，多肽对肿瘤生长和转移的抑制作用逐渐引起人们的重视。国内外学者通过从动植物中提取、噬菌体肽库筛选以及化学合成等方法，得到了一些具有抗肿瘤活性的小分子多肽，这些小肽可以针对肿瘤细胞的生长、发展的不同环节，特异性杀伤、抑制肿瘤细胞的浸润及转移。1990年Alino等发现5肽YIGSR(酪氨酸-异亮氨酸-甘氨酸-丝氨酸-精氨酸)可使肺癌转移能力下降(Alino SF，Unda F J，Perez-Yarza G.Laminin surface binding sites and metastatic potential of 3LLtumor cells，increased by indomethacin[J].Biochem Biophys ResCommun，1990，167(2)：731-738.)。抗肿瘤的小分子多肽分子量小、活性高，对多药抗性的肿瘤细胞系也具有良好的抑制活性。同时小分子多肽可以多种方式给药，不易引起免疫反应，且人工化学合成的生产成本较低，这些都预示着小分子抗肿瘤肽在临床方面有很好的应用前景。

最近，研究发现人的高分子激肽原第5结构域中富含组氨酸的区域能够选择性的抑制人脐静脉和毛细血管上皮细胞的增殖并抑制小鼠角膜新血管的形成，也能够作为一个抗粘附蛋白与VN竞争，与尿激酶受体结合，进而抑制上皮细胞的侵袭与粘附。

发明内容

本发明公开一种GHGKHKNK八肽的制备工艺，具有工艺稳定，原辅材料来源方便，生产周期短，生产成本低的特点。

本发明还公开了GHGKHKNK八肽在制备抗肿瘤药物中的应用。

本发明涉及的GHGKHKNK八肽具有下列一级结构：

Gly-His-Gly-Lys-His-Lys-Asn-Lys

本发明GHGKHKNK八肽的具体制备工艺如下：

以2-氯-三苯甲基树脂、4-甲基三苯甲基树脂、4-甲氧基三苯甲基树脂或三苯甲基树脂为起始原料，按固相合成的方法依次连接具有保护基团的氨基酸，获得保护八肽树脂，其间依次脱去Fmoc-保护基团，用TBTU或HBTU及HOBT为缩合剂进行接肽反应，同步进行脱侧链保护基团及切肽，获得该八肽化合物粗品。再经C18(或C8)柱分离纯化，冷冻干燥后，制得精品。

按照本发明，依次连接具有保护基团的氨基酸，获得保护八肽树脂，其间依次脱去Fmoc-保护基团的具体步骤包括：

(1)制备Fmoc-Lys(Boc)-树脂

将以2-氯-三苯甲基树脂、4-甲基三苯甲基树脂、4-甲氧基三苯甲基树脂或三苯甲基树脂，用DMF浸泡10-60分钟，使树脂充分溶胀，加DIPEA或DMPA和Fmoc-Lys(Boc)-OH，10～15℃反应1～24小时；

再加入甲醇10～50℃反应1～20小时，氮气吹干，树脂用DMF洗涤，获得Fmoc-Lys(Boc)-树脂；

所说的树脂取代量为：0.3-1.5mmol/g；粒径为100～400目；

Fmoc-Lys(Boc)-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；

DIPEA或DMPA的摩尔数为树脂的2～20倍；

脱帽试剂的加入量以树脂的重量为基准为5-20ml/g；

甲醇的摩尔系数为树脂的2～20倍；

(2)制备Fmoc-Asn(Trt)-Lys(Boc)-树脂：

在步骤(1)的Fmoc-Lys(Boc)-树脂中，加入脱帽试剂，10～50℃反应10～60分钟，吹干，分别用DMF和乙醇洗涤，吹干，加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Asn(Trt)-OH、TBTU/HBTU和HOBT的混合物，10～50℃反应1～5小时，吹干，分别用DMF和乙醇洗涤，吹干，得到Fmoc-Asn(Trt)-Lys(Boc)-树脂；

所说的脱帽试剂为：PIP∶DMF＝1∶2～5，体积比；

脱帽试剂的加入量以树脂的重量为基准为5-20ml/g；

混合物中：Fmoc-Asn(Trt)-OH的摩尔系数为树脂的2～5倍；

TBTU/HBTU和HOBT的摩尔系数为树脂的2～5倍；

所说的接肽试剂为：NMM∶DMF＝1∶5～15，体积比；

接肽试剂中，Fmoc-Asn(Trt)-OH的摩尔系数为树脂的2～5倍；