[发明专利]一种GHGKHKNK八肽的制备工艺及医药用途

权利要求书

1.一种GHGKHKNK八肽的制备工艺，其特征在于：以2-氯-三苯甲基树脂、三苯甲基树脂作树脂、4-甲基三苯甲基树脂或4-甲氧基三苯甲基树脂为起始原料，按固相合成的方法依次连接具有保护基团的氨基酸，获得保护八肽树脂，其间依次脱去Fmoc-保护基团，用TBTU或HBTU及HOBT为缩合剂进行接肽反应，同步进行脱侧链保护基团及切肽，获得该八肽化合物粗品；再经C18或C8柱分离纯化，冷冻干燥后，制得精品；

2.根据权利要求1所述的制备工艺，包括如下步骤：

(1)制备Fmoc-Lys(Boc)-树脂

将以2-氯-三苯甲基树脂、4-甲基三苯甲基树脂、4-甲氧基三苯甲基树脂或三苯甲基树脂，用DMF浸泡10-60分钟，使树脂充分溶胀，加DIPEA或DMPA和Fmoc-Lys(Boc)-OH，10～15℃反应1～24小时；

再加入甲醇10～50℃反应1～20小时，氮气吹干，树脂用DMF洗涤，获得Fmoc-Lys(Boc)-树脂；

所说的树脂取代量为：0.3-1.5mmol/g；粒径为100～400目；

Fmoc-Lys(Boc)-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；

DIPEA或DMPA的摩尔数为树脂的2～20倍；

脱帽试剂的加入量以树脂的重量为基准为5-20ml/g；

甲醇的摩尔系数为树脂的2～20倍；

(2)制备Fmoc-Asn(Trt)-Lys(Boc)-树脂：

在步骤(1)的Fmoc-Lys(Boc)-树脂中，加入脱帽试剂，10～50℃反应10～60分钟，吹干，分别用DMF和乙醇洗涤，吹干，加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Asn(Trt)-OH、TBTU/HBTU和HOBT的混合物，10～50℃反应1～5小时，吹干，分别用DMF和乙醇洗涤，吹干，得到Fmoc-Asn(Trt)-Lys(Boc)-树脂；

所说的脱帽试剂为：PIP∶DMF＝1∶2～5，体积比；

脱帽试剂的加入量以树脂的重量为基准为5-20ml/g；

混合物中：Fmoc-Asn(Trt)-OH的摩尔系数为树脂的2～5倍；

TBTU/HBTU和HOBT的摩尔系数为树脂的2～5倍；

所说的接肽试剂为：NMM∶DMF＝1∶5～15，体积比；

接肽试剂中，Fmoc-Asn(Trt)-OH的摩尔系数为树脂的2～5倍；

“TBTU/HBTU和HOBT”指的是：TBTU与HOBT的混合物，或者是HBTU与HOBT的混合物；

(3)制备Fmoc-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-树脂：

在步骤(2)的Fmoc-Asn(Trt)-Lys(Boc)-树脂中，加入脱帽试剂，反应，吹干，分别用DMF和乙醇洗涤，吹干；加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Lys(Boc)-OH、TBTU/HBTU和HOBT的混合物，反应，吹干，分别用DMF和乙醇洗涤，吹干，获得Fmoc-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-树脂；

混合物中：Fmoc-Lys(Boc)-OH的摩尔系数为树脂的2～5倍；

其余操作以及工艺条件同步骤(2)；

(4)制备Fmoc-His(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-树脂：

在步骤(3)的Fmoc-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-树脂中，加入脱帽试剂，反应，吹干，分别用DMF和乙醇洗涤，吹干；加入用接肽试剂溶解的Fmoc-His(Trt)-OH、TBTU/HBTU和HOBT的混合物，反应，吹干，分别用DMF和乙醇洗涤，吹干，获得Fmoc-His(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-树脂；

混合物中：Fmoc-His(Trt)-OH的摩尔系数为树脂的2～5倍；

其余操作以及工艺条件同步骤(2)；

(5)制备Fmoc-Lys(Boc)-His(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-树脂：

在步骤(4)的Fmoc-His(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-树脂中，加入脱帽试剂，反应，吹干，分别用DMF和乙醇洗涤，吹干；加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Lys(Boc)-OH、TBTU/HBTU和HOBT的混合物，反应，吹干，分别用DMF和乙醇洗涤，吹干，获得Fmoc-Lys(Boc)-His(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-树脂；

混合物中：Fmoc-Lys(Boc)-OH的摩尔系数为树脂的2～5倍；

其余操作以及工艺条件同步骤(2)；

(6)制备Fmoc-Gly-Lys(Boc)-His(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-树脂：

在步骤(5)的Fmoc-Lys(Boc)-His(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-树脂中，加入脱帽试剂，反应，吹干，分别用DMF和乙醇洗涤，吹干；加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Gly-OH、TBTU/HBTU和HOBT的混合物，反应，吹干，分别用DMF和乙醇洗涤，吹干，获得Fmoc-Gly-Lys(Boc)-His(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-树脂；

混合物中：Fmoc-Gly-OH的摩尔系数为树脂的2～5倍；

其余操作以及工艺条件同步骤(2)；

(7)制备Fmoc-His(Trt)-Gly-Lys(Boc)-His(Trt)-Ly s(Boc)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-树脂：

在步骤(6)的Fmoc-Gly-Lys(Boc)-His(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-树脂中，加入脱帽试剂，反应，吹干，分别用DMF和乙醇洗涤，吹干；加入用接肽试剂溶解的Fmoc-His(Trt)-OH、TBTU/HBTU和HOBT的混合物，反应，吹干，分别用DMF和乙醇洗涤，吹干，获得Fmoc-Gly-Lys(Boc)-His(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-树脂；

混合物中：Fmoc-His(Trt)-OH的摩尔系数为树脂的2～5倍；

其余操作以及工艺条件同步骤(2)；

(8)制备Boc-Gly-His(Trt)-Gly-Lys(Boc)-His(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-树脂：

在步骤(7)的Fmoc-His(Trt)-Gly-Lys(Boc)-His(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-树脂中，加入脱帽试剂，反应，吹干，分别用DMF和乙醇洗涤，吹干；加入用接肽试剂溶解的Boc-Gly-OH、TBTU/HBTU和HOBT的混合物，反应，吹干，分别用DMF和乙醇洗涤，吹干，获得Boc-Gly-His(Trt)-Gly-Lys(Boc)-His(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-树脂；

混合物中：Boc-Gly-OH的摩尔系数为树脂的2～5倍；

其余操作以及工艺条件同步骤(2)；

(9)制备Gly-His(Trt)-Gly-Lys(Boc)-His(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Lys(Boc)

在步骤(8)Boc-Gly-His(Trt)-Gly-Lys(Boc)-His(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-树脂中，加入遇冷至10～20℃的切肽试剂，10～50℃反应1～5小时，减压蒸去除溶剂，加入乙醚沉淀，收集沉淀物，用乙醚洗，P₂O₅真空干燥，获得粗品；

所说的切肽试剂的组分为：TFA/EDT/HO/TIS＝90-95/2-5/1-5，体积比。

3、GHGKHKNK八肽在制备抗肿瘤药物中的应用。