[发明专利]一次性测定生物体中十种氨基类生物活性物质的方法

权利要求书

1.一次性测定生物体中十种氨基类生物活性物质的方法，其特征在于， 该方法包括如下步骤：

将生物体液经去蛋白处理后，加入KHCO₃溶液调PH值后，再加入和调PH 后溶液体积相同的、浓度为2-10mg/ml的丹酰氯进行衍生化反应，反应温度为 80℃水浴，反应时间为20分钟；

利用高效液相色谱仪和荧光检测器完成生物体液中肾上腺素、去甲肾上腺 素、多巴胺、五-羟色胺、组胺、谷氨酸、天冬氨酸、γ-氨基丁酸、甘氨酸和 三碘甲状腺原氨酸十种氨基类生物活性物质的检测，其中，

色谱条件为：

色谱柱：Hypersil ODS C18，250×4.6mm，5μm；

流动相：流动相B是甲醇∶乙腈＝2∶3；流动相A是20mmol/l的醋酸盐缓冲 液，其中加入3mmol/l的辛烷磺酸钠，0.1mmol/l的Na-EDTA，并用氢氧化钠 调至pH值4.8，用0.45u m微孔滤膜过滤；

流速：1ml·min^-1；

柱温：30℃；

荧光检测器的激发波长为350nm，发射波长为510nm；

液相色谱中采用梯度洗脱，梯度洗脱的条件如下表所列。

  时间   流动相B，％   流动相A，％   0～10min   10～20→35～45   90～80→65～55   10～30min   35～45   65～55   30～40min   35-45→75～85   65～55→25～15   40～50min   75～85   25～15   50～70min   75～85→85～95   25～15→10～5   70～80min   85～95   15～5