[发明专利]可溶性VEGFR双功能融合受体、其制备方法及用途

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，更具体地，本发明公开了一类双功能融合受体、 其制备方法及其在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术

肿瘤尤其是恶性肿瘤是当今世界严重危害人类健康的疾病，在各种疾病所 致死亡中高居第二位。而且近年来，其发病率呈明显上升趋势。恶性肿瘤治疗 效果差，晚期转移率高，预后多不佳。目前临床上所采用的常规治疗方法如放、 化疗和手术治疗虽然在很大程度上缓解了病痛，延长了生存时间，但这些方法 均存在很大的局限性，其疗效难以进一步提高。

肿瘤的生长有两个明显不同的阶段，即从无血管的缓慢生长期转为有血管 的快速增殖期，血管的生成使肿瘤能获得足够的营养而完成血管切换期，如果 没有血管的生成，原发肿瘤的生长不超过1～2mm，转移则无法实现。血管内皮 生长因子(VEGF)是一类能促进内皮细胞分裂增殖、促进新生血管的形成、提高 血管通透性的生长因子，它与细胞表面的血管内皮生长因子受体结合，通过激 活酪氨酸激酶信号转导途径发挥功能。在肿瘤组织中，肿瘤细胞、肿瘤侵入的巨 噬细胞和肥大细胞能分泌高水平的VEGF，以旁分泌的形式刺激肿瘤血管内皮细 胞，促进内皮细胞增殖、迁移，诱导血管形成，促进肿瘤持续生长，并提高血管通 透性，引起周围组织纤维蛋白沉着，促进单核细胞、成纤维细胞内皮细胞侵润，有 利于肿瘤基质形成和肿瘤细胞进入新生血管，促进肿瘤转移，因而抑制肿瘤血管 生成被认为是当前最具有前途的肿瘤治疗方法之一。Genentech公司的抗癌 新药Avastin(抗VEGF人源化抗体)已于2004年2月获得美国FDA批准上市，用 于一线治疗转移性结直肠癌，并有望用于其它肿瘤，包括非小细胞肺癌和肾癌的 治疗。此外，用可溶性受体阻断VEGF和VEGFR的传导途径也被证明是一种行之有 效的方法。VEGF家族包括VEGF、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E及PIGF(胎盘 生长因子)，它们之间的氨基酸序列高度同源，都与同型的酪氨酸激酶受体结合。 血管内皮生长因子受体(VEGFR)属于酪氨酸激酶受体超家族，它们有相似的结 构，均由胞外区、跨膜区、胞内区组成。目前发现的VEGFR主要有3种： VEGFR1(Flt-1)，VEGFR2(KDR)，VEGFR3。与VEGFR1结合的主要是VEGF、VEGF-B， 与VEGFR2结合的主要是VEGF、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E，与VEGFR3结合的主要 是VEGF-C、VEGF-D。VEGFR1和VEGFR2主要位于肿瘤血管内皮细胞表面，VEGFR1 主要介导细胞骨架重排及引起细胞迁移，VEGF对内皮细胞的增殖、分化由VEGFR2 介导。VEGFR3特异表达在淋巴内皮细胞中，在动脉、静脉、毛细血管内皮中基 本没有表达。VEGF-C和VEGF-D可通过VEGF-C/VEGF-D/VEGFR3信号系统发挥作 用，从而导致肿瘤淋巴管的增生和淋巴结的转移[Neufeld G等，FASEB J，1999， 13：9-22]。Regeneron制药公司将VEGFR1膜外区与抗体Fc进行融合，制备了 VEGFR-Fc融合蛋白，它能与血管内皮细胞表面的VEGFR竞争性结合VEGF和 VEGF-B，从而抑制VEGF和VEGF-B的生物活性，阻断新生血管的形成，实验结果 表明VEGFR1-Fc具有比Avastin更强的抗肿瘤作用[Wulff C等，J Clin Endocrinol Metab.2001，86(7)：3377-86.Holash J等，PNAS 2002，17： 11393-11398]。但是，无论是Avastin还是VEGFR1-Fc都是通过阻断VEGF或/和 VEGF-B所诱导的生物学功能，即抑制肿瘤的血管生成来发挥抗肿瘤作用。它们 均不能与VEGF-C或VEGF-D相结合，而VEGF-C和VEGF-D可诱导肿瘤内淋巴管生成， 进而促进肿瘤淋巴结转移，所以它们不能抑制肿瘤淋巴结转移。

因此，研究出既能与血管内皮细胞表面的VEGFR竞争性结合VEGF和VEGF-B， 还能与VEGF-C或VEGF-D相结合，从而不仅抑制VEGF和VEGF-B的生物活性，阻断 新生血管的形成，还能阻断VEGF-C和VEGF-D对肿瘤内淋巴管生成的诱导，防止 肿瘤淋巴结转移的高效抗肿瘤药物一直是本领域的技术人员急待解决的问题。

发明内容

本发明公开了：