[发明专利]一种阿托西班的固相合成方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种阿托西班的固相合成方法。

背景技术：

阿托西班是子宫内及蜕膜、胎膜上受体的环状肽催产素竞争性拮抗剂， 是产科药物中的一种突破产品，已在奥地利、丹麦和瑞典上市，用于推迟不足月 分娩。估计不久还将在荷兰、德国和英国上市，我国目前有进口的上市但目前还 没有国产化.阿托西班可剂量相关性地抑制宫缩，并使环状肽催产素介导的前列 腺素分泌减少，达到保胎的目的，在中国，年出生率为2000万，按目前临床统 计数字，约5-15％的孕妇需要进行保胎治疗，按平均10％计，病人数量约为200 万，所以该品种有较大的市场前景。

阿托西班的结构如下：

c[Mpr-D-Tyr(OEt)-Ile-Thr-Asn-Cys]-Pro-Orn-Gly-NH₂

为环状性多肽，英名为：Atosiban，根据其序列的特征，合成路线 有通过MBHA树脂，Boc法固相合多肽，再通过溶液中碘氧化形成硫 硫键成环的产品，见专利EP0710243。

发明内容：

本发明的目的是提供一种阿托西班的固相合成工艺。本发明需要解决 的技术问题是：选择一种氧化方法，使其满足：(1)在多肽合成中具有稳定性， (2)可以方便的载体反应，(3)可以避免空气氧化中因多肽溶解性差而导致氧 化时间长或氧化不完全的缺陷，(4)可以缩短氧化时间大大提高效率。

本发明中一些常用的缩写具有以下含义；

Fmoc：芴甲氧羰基

Fmoc-AA：芴甲氧羰基保护的氨基酸

tBu：叔丁基

HoBt：1-羟基苯骈三唑

HBTU，苯并三氮唑-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸酯

DIC：N，N-二异丙基碳化二亚胺

DIEA：N，N-二异丙基乙胺

MPa：巯基丙酸

D-Tyr(Et)：D-型的酪氨酸链用乙基保护

Ile：异亮氨酸

Thr：苏氨酸

Asn：天门冬酰胺

Cys：半胱氨酸

Pro：脯氨酸

Orn：鸟氨酸

Gly：甘氨酸

Trt：三苯甲基

Et：乙基

Boc：叔丁氧羰基

DMF：N，N-二甲基甲酰胺

Piperidine：六氢吡啶

Fmoc-Rink Amide Am resin：用Fmoc保护的Rink氨甲基树脂

TFA：三氟醋酸

TIS：三异丙基硅烷

MeOH：甲醇

CH₂CL₂：二氯甲烷

Kniser test检测试剂为：茚三酮

本发明的技术方案为：一种阿托西班的固相合成方法，首先使用氨甲基树脂 作载体，按照Fmoc/tbu固相多肽合成的方法将氨基酸逐个连上，再用树脂上碘 氧化的方法形成硫硫键，最后再用三氟醋酸∶三异丙基硅烷∶水∶对甲酚的混合 溶液将肽从树脂上切下，就能直接得到形成硫硫键的粗品，经制备HPLC纯化冷 冻得到阿托西班。

在接氨基酸过程中，用Fmoc-AA/HBTU/HOBT/DIEA(体积比为1∶1∶1∶ 2)，Fmoc-AA缩合过程过量2-5倍，每一步缩合都经过凯撒试剂(Kaiser test) 检测，如颜色呈阳性则重复接氨基酸，然后用20％哌啶/DMF脱Fmoc，再用碘 的甲醇溶液与接上九个氨基酸的树脂反应30-90分钟形成硫硫键，每克树脂用 6-10ml体积比三氟醋酸∶三异丙基硅烷∶水∶对甲酚＝88∶2∶5∶5的混合液 将肽从树脂上切下。得到的粗品产率为92.3％左右，HPLC为78.2％。需要注意 的是，树脂上碘氧化已形成硫硫键，所以选择切割液切割树脂时不能用含有二硫 醇的切割液。从上可以看出用此方法合成阿托西班，产率及纯度都比较理想。另 外，此法对合成其它氨基酸类的硫硫键环化肽也具有一定的意义。