[发明专利]一种双歧杆菌生长促进因子及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种双歧杆菌生长促进因子及其制备方法。

背景技术

在人体肠道中栖息着400多种、数量多达百万亿的细菌，其生物量达粪便干重的1/3-1/2。这些细菌按照对人体健康的影响可分为有益、有害和无害三类群，正常情况下这三类群细菌处于相对的平衡状态。若人体有益菌如双歧杆菌等处于优势，则对净化肠道、改善营养、维护人体健康起重要作用。双歧杆菌(Bifidobacterium)是一种益生菌，其主要功能有：维持肠道菌群平衡，治疗肠道功能紊乱；抗肿瘤作用；激活免疫系统，提高人体免疫机能；营养作用；控制内毒素的产生；降低自氧化作用，延缓机体衰老；降低血清中胆固醇含量；提高宿主对放射线的耐受性等。由于双歧杆菌对营养要求苛刻，在大多数基质中生长缓慢，所以双歧杆菌的培养和生长常常需要添加双歧杆菌生长促进因子(bifidus factor)来促进其繁殖和生长。

现有的双歧杆菌生长促进因子主要包括以下六类物质：①纯寡聚糖类物质：一般是由2-10个单糖通过糖苷键聚合在一起所形成的，如已知的乳果糖、果聚糖、大豆低聚糖、异麦芽糖等二十余种。②蛋白酶解产物及一些蛋白质类物质，如胃粘膜蛋白酶解产物，其生物活性部分为糖蛋白中的寡糖；酪蛋白酶解物；牛奶中的α-乳清蛋白和乳铁蛋白等。③多糖类物质，如云芝多糖的水提物；胡萝卜中的含氮多糖。④短链脂肪酸类物质，如费氏丙酸杆菌产生的丙酸盐(脂)能刺激和促进双歧杆菌的生长繁殖。⑤天然植物及中草药的提取物，如茶叶中的茶多酚；人参中的人参皂甙及五加科植物的水提物。⑥其他类物质，如双泛酰硫乙胺和泛酰硫氢乙胺等。

其中，现有的用作双歧杆菌生长促进因子的蛋白酶解产物主要有酵母提取物、牛肉浸液和大豆酶解产物。现有的大豆酶解产物为只采用胰蛋白酶酶解大豆所得的产物。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种与现有的仅用胰蛋白酶酶解大豆制备双歧杆菌生长促进因子的方法相比，具有更好的促进双歧杆菌的繁殖和生长效果的新方法，以及由该方法制得的双歧杆菌生长促进因子。

本发明的方法为：在水中，用中性蛋白酶酶解大豆，更佳的还加入胰蛋白酶，将其与中性蛋白酶共同酶解大豆(Glycine max(L.)Merrill)，即制得本发明的双歧杆菌生长促进因子。

其中，所述的大豆的用量较佳的为7.99-20.00％；所述的水较佳的为去离子水，水的用量较佳的为79.80-92.00％；当仅用中性蛋白酶酶解豆浆时，中性蛋白酶的用量较佳的为0.01-0.2％；当用中性蛋白酶和胰蛋白酶共同酶解时，中性蛋白酶的用量较佳的为0.005-0.1％，胰蛋白酶的用量较佳的为0.005-0.1％；上述百分比皆为占水、大豆和蛋白酶总质量的百分比，所述的蛋白酶为中性蛋白酶或中性蛋白酶加胰蛋白酶。

其中，对各原料的要求为本领域常规要求，如：胰蛋白酶的酶活为2000-2500u/mg；中性蛋白酶的酶活为100-130u/mg；大豆中水溶性蛋白≥30.0％，杂质≤1.0％，水分≤14.0％，子叶变色粒≤5.0％；水较佳的为去离子水，去离子水中Na⁺≤0.1％，SiO₂＜0.05％，pH值＝6.5-7.5；百分比为质量百分比。

其中，所述的酶解按本领域常规酶解方法操作。优选工艺步骤及其条件如下：

(1)向水和大豆混合磨浆制得的豆浆中加入酶进行酶解，之后加热酶解液。

所述的豆浆可采用市售的豆浆或按本领域常规方法自制。制备方法较佳的为：将7.99-20.00％的大豆和自来水在40-80℃混合3-10小时，之后用去离子水冲洗，再加入79.80-92.00％的去离子水混合磨浆，加热到60-100℃，维持2-20分钟，冷却至42℃，用氢氧化钠调节豆浆pH为7.5-8.0。

所述的酶解的温度较佳的为30-60℃，酶解的时间较佳的为2-10小时。酶解之后，加热酶解液的温度较佳的为60-100℃，加热时间为2-20分钟。

(2)离心取上清液，微孔滤膜抽滤，浓缩，葡聚糖凝胶柱层析，收集紫外光波长为280nm的洗脱液，浓缩至干即可。