[发明专利]一种游离肝癌细胞的检测和分选方法

权利要求书

1.一种肝癌细胞的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(a)采集样品；

(b)从样品中分离单个核细胞；

(c)以与去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)特异结合的物质A与单个核细胞中的肝癌细胞结合，形成复合物B；

(d)以荧光素间接标记复合物B；

(e)用流式细胞仪检测样品中的肝癌细胞。

2.权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述物质A选自ASGPR的配体或抗体。

3.权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(b)中采取的分离方法为密度梯度细胞分离法。

4.权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述样品选自骨髓、血液或其他体液。

5.权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述其他体液为淋巴液、胸水或腹水。

6.权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述物质A为ASGPR的配体，所述ASGPR的配体为可与ASGPR的糖识别区(CRD)特异结合的蛋白、糖、脂类、多肽或核酸。

7.权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述可与ASGPR的CRD特异结合的蛋白为以半乳糖残基或N-乙酰半乳糖胺残基为端基的糖蛋白。

8.权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述可与ASGPR的CRD特异结合的蛋白为去唾液酸胎球蛋白。

9.权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述物质A为ASGPR胞外区的抗体。

10.权利要求9所述的检测方法，其特征在于，所述抗体为单克隆抗体。

11.权利要求1-8任一权利要求所述的检测方法，其特征在于，所述物质A为ASGPR的配体，所述步骤(c)中ASGPR的配体与生物素相连接，步骤(d)中采用荧光素-链霉亲和素或荧光素-生物素抗体标记复合物B。

12.权利要求8所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(c)中去唾液酸胎球蛋白的反应浓度为0.1-0.8mg/ml。

13.权利要求11或12所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(c)中去唾液酸胎球蛋白的反应浓度0.4-0.8mg/ml。

14.权利要求10所述的检测方法，其特征在于，所述抗体为小鼠抗人ASGPR单抗、兔抗人ASGPR单抗或大鼠抗人ASGPR单抗。

15.权利要求14所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(d)中采用荧光素-二抗标记复合物B。

16.权利要求14所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(c)中ASGPR单抗的反应浓度为0.1-5.0μg/ml。

17.权利要求16所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(c)中ASGPR单抗的反应浓度为2.0-4.0μg/ml。

18.权利要求17所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(c)中抗体为小鼠抗人ASGPR单抗。

19.一种肝癌细胞的分选方法，其特征在于，包括以下步骤：

(a)采集样品；

(b)从样品中分离单个核细胞；

(c)以与去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)特异结合的物质A与单个核细胞中的肝癌细胞结合，形成复合物B；

(d)以荧光素间接标记复合物B；

(e)用流式细胞仪分选肝癌细胞。

20.权利要求19所述的分选方法，其特征在于，所述物质A选自ASGPR的配体或抗体。

21.权利要求19所述的分选方法，其特征在于，所述步骤(b)中采取的分离方法为密度梯度细胞分离法。

22.权利要求19所述的分选方法，其特征在于，所述样品选自血液、骨髓或其他体液。

23.权利要求22所述的分选方法，其特征在于，所述其他体液为淋巴液、胸水或腹水。

24.权利要求20所述的分选方法，其特征在于，所述物质A为ASGPR的配体，所述ASGPR的配体为可与ASGPR的糖识别区(CRD)特异结合的蛋白、糖、多肽或核酸。