[发明专利]增强胎肝造血干细胞CD34表达的培养液及其制备方法

权利要求书

1、一种增强胎肝造血干细胞CD34表达的培养液，其特征在于，组分和重量百分比为：

MEM：56.5％-64.7％；

RPMI-1640：29.4％-30.4％；

Hanks：5.88％-13.0％；

人类干细胞生长因子-2：470×10^-9％-1740×10^-9％；

人类干细胞生长因子：1.9×10^-9％-2.8×10^-9％；

人类粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子：2.0×10^-9％-2.9×10^-9％；

CD135配体蛋白：9.4×10^-9％-10.8×10^-9％；

人类促红细胞生成因子：1.4×10^-9％-2.4×10^-9％；

人类上皮细胞生成因子：9.4×10^-9％-10.8×10^-9％；

人类促成纤维细胞生成因子-b：9.4×10^-9％-10.8×10^-9％。

2、根据权利要求1所述的增强胎肝造血干细胞CD34表达的培养液，其特征是，组分和重量百分比为：

MEM：59.36％-61％；

RPMI-1640：29.7％-30.14％；

Hanks：9.3％-10.5％；

人类干细胞生长因子-2：850×10^-9％-1260×10^-9％；

人类干细胞生长因子：2.1×10^-9％-2.5×10^-9％；

人类粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子：2.2×10^-9％-2.6×10^-9％；

CD135配体蛋白：9.8×10^-9％-10.4×10^-9％；

人类促红细胞生成因子：1.7×10^-9％-2.1×10^-9％；

人类上皮细胞生成因子：9.7×10^-9％-10.4×10^-9％；

人类促成纤维细胞生成因子-b：9.6×10^-9％-10.4×10^-9％。

3、一种如权利要求1所述的增强胎肝造血干细胞CD34表达的培养液的制备方法，其特征是，包括以下步骤：

①按所述比例取MEM、RPMI 1640、Hanks混合后，充分搅拌，制得基础培养液；

②按所述比例再取人类干细胞生长因子-2、人类干细胞生长因子、人类粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、CD135配体蛋白、人类促红细胞生成因子、人类上皮细胞生成因子、人类成纤维细胞生成因子-b依次加入基础培养液中，充分搅拌均匀、溶解；

③将胎肝间充质细胞分离，将纯化出的间充质细胞，根据计数器的读数取10⁷个胎肝间充质细胞置入培养瓶，加入DMEM培养液和2％人血清进行培养，然后将上清液抽出，进行冲洗，

进一步加入DMEM培养液和5％人血清与胎肝间充质细胞在培养瓶内混合，连续培养将上清液全部收集，

上清液经过过滤后，再经过离心，将全部细胞碎片及非溶解性的物质去除，制得条件培养液；

④将条件培养液与MEM混合后，充分搅拌均匀后形成混合培养液，利用碳酸氢钠将混合培养液的pH调节至7.40～7.45，经过过滤即可制得干细胞CD34增强表达培养液。

4、根据权利要求3所述的增强胎肝造血干细胞CD34表达的培养液的制备方法，其特征是，步骤③中所述的胎肝，是指：取19-20周标准检验后的人类胎肝。

5、根据权利要求3所述的增强胎肝造血干细胞CD34表达的培养液的制备方法，其特征是，步骤③中所述的2％人血清进行培养，是指：经10-14天的培养，

6、根据权利要求3所述的增强胎肝造血干细胞CD34表达的培养液的制备方法，其特征是，步骤③中所述的将上清液抽出后，用Hanks对培养瓶中的胎肝间充质细胞进行冲洗二次。