[发明专利]一种检测石蜡标本DNA甲基化的方法

权利要求书

1、一种检测石蜡标本DNA基因甲基化的方法，包括如下步骤：

石蜡切片脱蜡、细胞裂解、DNA亚硫酸氢钠修饰、脱磺化、修饰后的DNA纯化、PCR扩增和检测分析，其特征在于先将石蜡标本切片固定在载玻片或过滤柱上，直接依次进行脱蜡、酒精水化、亚硫酸氢钠修饰、脱磺化处理，再用裂解液和蛋白酶K消化后从细胞中释放出DNA修饰产物，纯化后用作PCR模板。

2、按权利要求1所述的检测石蜡标本DNA基因甲基化的方法，其特征在于步骤如下：

1)、固定石蜡切片：将石蜡切片固定于载玻片或置于过滤柱上；

2)、脱蜡：用二甲苯脱蜡，再用酒精水化；

3)、DNA亚硫酸氢钠修饰：直接在载玻片或过滤柱用高浓度亚硫酸氢钠修饰液进行亚硫酸氢钠修饰；

4)、脱磺化处理：修饰后的DNA用脱磺化液在细胞内进行脱磺化处理；

5)、裂解和消化细胞：加入裂解液和蛋白酶K在55℃消化；

6)、灭活蛋白酶K：消化后的产物在85℃保温10分钟，使蛋白酶K灭活后，产物即可作为模板进行PCR扩增；

7)、PCR扩增和检测分析。

3、按权利要求2所述的检测石蜡标本DNA基因甲基化的方法，其特征在于：所说的高浓度亚硫酸氢钠修饰液含5M亚硫酸氢钠，10mM对苯酚；所说的裂解液为：2.5％tween-20，50mM Tris，1mMEDTA，PH8.0。