[发明专利]一种提高林可霉素产量的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地说，涉及一种提高林可霉素产量的方法。

背景技术

林可霉素(Lincomycin，简称LCM)又称洁霉素，对革兰氏阳性菌有很好的作用，它没有交叉耐药性而且本身的毒性较低，所以被广泛应用于由革兰氏阳性菌引起的疾病，同时，对革兰氏阴性菌亦有一定的抑制作用，林可酰胺类抗生素已成为临床应用上主要的抗生素之一。

因此，对林可霉素的研究成为了一个热点。但国内对其研究主要集中在菌种选育方面，而国外同行对其发酵过程的研究主要集中在林可霉素合成途径的研究上，对工艺改进方面的研究只有培养温度对林可霉素产量的影响的报道，金属离子对林可霉素产量的影响尚未见到报道。

发明内容

本申请的发明人在研究提高林可霉素产量的过程中发现，向林肯链霉菌(Streptomyceslincolnensis)的发酵培养基中加入金属离子，能提高林可霉素的产量。

因此，本发明的目的在于，提供一种提高林可霉素产量的方法，该方法通过向林可霉素的发酵培养基中加入金属离子来实现。

根据本发明的一个优选实施例，加入的金属离子为单独加入。

根据本发明的一个优选实施例，加入的金属离子为复合加入。

使用本发明提供的方法，通过向林可霉素的发酵培养基中加入金属离子，无论是加入单独的金属离子(例如Mg²⁺、Fe³⁺和Zn²⁺)，还是加入复合金属离子(例如Mo⁶⁺、Mg²⁺、Fe³⁺和Zn²⁺组成的复合金属离子)，均能显著提高林可霉素的生物合成。

具体实施方式

以下结合具体实施例，对本发明作进一步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本发明而非用于限定本发明的范围。

下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，如《分子克隆：实验室手册》(New York：Cold Spring Harbor Laboratory Press，1989)中所述的条件或生产厂商推荐的条件进行。

在本发明的下述实施例中，使用的林肯链霉菌(Streptomyces lincolnensis)已于2008年04月25日提交位于武汉大学的中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏号为CCTCC M 208064。

除特别说明外，以下实施例中所使用的％，‰均为重量比。

在本发明的实施例中，发酵培养基的配方为：0.8％(NH₄)₂SO₄，0.8％NaNO₃，0.5％NaCl，0.02％K₂HPO₄，3％黄豆饼粉，0.2％玉米浆，0.8％CaCO₃，5％葡萄糖，pH7.0。

在本发明的实施例中，林可霉素的效价采用杯碟法进行检测，中国药典2005版(二部)。

实施例1、添加金属离子对林可霉素产量的影响

配制林可霉素的发酵培养基，并向林可霉素发酵培养基中分别添加Na₂MoO₄、CoCl₂、MnCl₂、MgCl₂、FeCl₃、FeCl₂、ZnCl₂、CuCl₂，使它们在相应的培养基中的重量比浓度分别为0.001‰，0.005‰，0.01‰，0.02‰以及0.05‰，同时，以不添加金属离子的林可霉素原始发酵培养基作为对照培养基，接入林肯链霉菌(Streptomyces lincolnensis)发酵培养168小时后，取样测定林可霉素的效价，结果如表1所示。

表1、添加金属离子对林可霉素产量的影响

根据表1的结果，在培养基中添加上述金属离子后，林可霉素的效价发生了不同程度的改变，其中，添加0.001～0.005‰的MgCl₂，0.01～0.05‰的FeCl₃或0.001～0.005‰的ZnCl₂后，林可霉素的效价获得提高明显。

实施例2、复合添加金属离子对林可霉素产量的影响

2.1、金属离子正交试验