[发明专利]一种重组人釉原蛋白及其制备方法无效
| 申请号： | 200810036471.2 | 申请日： | 2008-04-22 |
| 公开（公告）号： | CN101565463A | 公开（公告）日： | 2009-10-28 |
| 发明（设计）人： | 束蓉;程岚 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学医学院附属第九人民医院 |
| 主分类号： | C07K14/47 | 分类号： | C07K14/47;C12N15/12;C12N15/70 |
| 代理公司： | 上海翼胜专利商标事务所(普通合伙) | 代理人： | 翟 羽 |
| 地址： | 200011上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 重组 人釉原 蛋白 及其 制备 方法 | ||
1、一种重组人釉原蛋白，其特征在于：通过下列方法制得：
a、克隆X染色体编码的人釉原蛋白成熟肽基因hAm；
b、构建含有上述基因的重组原核表达质粒PGEX4T1-hAm；
c、将步骤b获得的重组原核表达质粒PGEX4T1-hAm转化表达菌株E.coli.Rosetta；
d、诱导步骤c获得的克隆表达菌株表达融合蛋白GST-hAm；
e、通过GST亲和层析纯化融合蛋白。
2、根据权利要求1所述的重组人釉原蛋白，其特征在于：在步骤a中克隆位点的两个内切酶EcoR I和Sal I作为将目的基因克隆入载体的内切酶。
3、根据权利要求2所述的重组人釉原蛋白，其特征在于：所述内切酶EcoRI和Sal I酶切位点的引物序列如下：Am-EcoR I 5’CCG GAA TTC ATGCCT CTA CCA CCT CAT CCT G 3’；Am-Sal I 5’ACGC GTC GAC TTAATCCAC TTC CTC CCG CTT G 3’。
4、根据权利要求3所述的重组人釉原蛋白，其特征在于：步骤a所述的人釉原蛋白成熟肽基因由人X染色体编码，其组织来源为人胚胎的乳牙牙胚组织，步骤b所述的重组原核表达质粒是将人釉原蛋白成熟肽编码序列插入原核表达质粒PGEX4T1而得到的，步骤c所用的是专门用于含有稀有密码子的真核蛋白在大肠杆菌中的表达宿主菌E.coli.Rosetta，步骤d所述的含有重组质粒的克隆表达菌株用异丙基硫代-β-D半乳糖苷诱导表达融合蛋白GST-hAm，步骤e所表达的融合蛋白通过GST亲和层析纯化。
5、一种重组人釉原蛋白的制备方法，包括以下步骤：
a、克隆X染色体编码的人釉原蛋白成熟肽基因hAm；
b、构建含有上述基因的重组原核表达质粒PGEX4T1-hAm；
c、将步骤b获得的重组原核表达质粒PGEX4T1-hAm转化表达菌株E.coli.Rosetta；
d、诱导步骤c获得的克隆表达菌株表达融合蛋白GST-hAm；
e、通过GST亲和层析纯化融合蛋白。
6、根据权利要求5所述的方法，其特征在于：在步骤a中克隆位点的两个内切酶EcoR I和Sal I作为将目的基因克隆入载体的内切酶。
7、根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述内切酶EcoR I和SalI酶切位点的引物序列如下：Am-EcoR I 5’CCG GAA TTC ATG CCT CTACCACCT CAT CCT G 3’；Am-Sal I 5’ACGC GTC GAC TTAATC CAC TTCCTC CCG CTT G 3’。
8、根据权利要求7所述的方法，其特征在于：步骤a所述的人釉原蛋白成熟肽基因由人X染色体编码，其组织来源为人胚胎的乳牙牙胚组织，步骤b所述的重组原核表达质粒是将人釉原蛋白成熟肽编码序列插入原核表达质粒PGEX4T1而得到的，步骤c所用的是专门用于含有稀有密码子的真核蛋白在大肠杆菌中的表达宿主菌E.coli.Rosetta，步骤d所述的含有重组质粒的克隆表达菌株用异丙基硫代-β-D半乳糖苷诱导表达融合蛋白GST-hAm，步骤e所表达的融合蛋白通过GST亲和层析纯化。
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