[发明专利]黄瓜白粉病抗性主效QTL紧密连锁分子标记方法和应用方法

说明书

技术领域

本发明涉及的是一种生物技术领域的分子标记方法和应用方法，尤其是一种黄瓜白粉病抗性主效QTL紧密连锁分子标记方法和应用方法。

背景技术

黄瓜白粉病(PM，powdery mildew)由专性活体寄生的白粉菌引起，在温室和大田都普遍发生的叶部病害；病原白粉菌主要包括瓜单囊壳(Podosphaeraxanthii)和二孢白粉菌(Golovinomyces cichoracearum)两种；中国以瓜单囊壳(P.xanthii)危害较为普遍。白粉病病原寄主广泛，成熟孢子可随空气气流传播；干燥、凉爽季节易发生，白粉病菌可以感染黄瓜植株叶片、茎和花，在开花期感染白粉病可减少产量20～40％。喷洒杀菌剂和种植抗病品种是防御此病的主要方法。但长期使用杀菌剂会危害环境安全，且易引起病菌小种变异产生拮抗作用。推广种植抗病品种是安全、环保和高效的控制策略。大量前人工作(毛爱军，植物保护科学，2005，V21：302～321；；Morishita M，Japan Agricultural ResearchQuarterly(日本农业科学季刊)，2003，37(1)：7～14；Sakata Y，Theor ApplGenet(应用遗传理论)，2006，112：243～250；张桂华，园艺学报，2004，31(2)：189～192)已表明，黄瓜白粉病的抗性遗传机理复杂；常规育种实践中，对于抗白粉病材料的选择是十分困难的：一方面选育周期长，需要经历杂交和回交复杂的选择程序，另一方面白粉病的发生受到很多因素的综合影响，例如：温度、湿度和病菌小种等，鉴定抗性材料的过程不容易控制。这些都导致黄瓜白粉病育种进展缓慢的重要原因。

近几年发展起来的分子标记辅助育种技术，有效地解决了着这一问题，通过构建重要抗源的遗传图谱和数量性状位点(Quantitative Tratit Loci，QTL)分析，可以找到与黄瓜白粉病抗性主效QTL紧密连锁(或共分离)的分子标记。使用与某一特定抗源抗白粉病主效QTL紧密连锁的分子标记，可以对该特定抗源的后代及其衍生品种(系)在苗期进行早代筛选，淘汰不抗病的植株，节约生产成本，提高育种和选择效率(张桂华，园艺学报，2004，31(2)：189～192)；，。JohanD，TRENDS in Plant Science(植物科学趋势)，2003，Vol.8 No.7；Sakata Y，Theor Appl Genet(应用遗传理论)，2006，112：243～250；)。

经对现有技术文献的检索发现，专利名称为“鉴定黄瓜白粉病抗性的引物序列及其鉴定方法”，公开号：CN1482132。该专利技术公开了一种鉴定黄瓜白粉病抗性的引物序列及其鉴定方法，引物序列由上游引物：5′-CAG TAA ATG AAAGAA AAG AAG-3′，下游引物：5′-ATA CAT AGC CAT ACA AAA AT-3′组成，使用该引物序列的鉴定黄瓜白粉病抗性的方法，包括如下步骤：(1)提取黄瓜基因组的DNA；(2)进行PCR扩增；(3)PCR扩增产物的凝胶电泳分析；(4)依据各被鉴定样品在凝胶上条带的相对位置，鉴定黄瓜白粉病的抗性。但是该专利技术是代表单基因控制的白粉病抗性基因作用形式，鉴定结果与田间抗病吻合率还不高。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种黄瓜白粉病抗性主效QTL紧密连锁的分子标记方法和应用方法。本发明是一种多基因控制的白粉病抗性的技术，比背景技术在鉴定结果与田间抗病吻合率明显提高，不受环境条件的影响，节约了成本，提高了育种和选择效率。

本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明所涉及的黄瓜白粉病抗性主效QTL紧密连锁分子标记的方法，包括以下步骤：

①黄瓜白粉病感病品种S94(♀)和黄瓜白粉病抗病品种S06(♂)杂交，得到杂种F₁；

②由杂种F₁自花授粉获得子代，通过子代单粒传(SSD)方法获得F₇代的重组自交系；

③分离每个重组自交系单株黄瓜叶片的DNA，进行PCR扩增，扩增产物电泳分离后，获得分子标记资料；