[发明专利]黄瓜白粉病抗性主效QTL紧密连锁分子标记方法和应用方法

权利要求书

1、一种黄瓜白粉病抗性主效QTL紧密连锁分子标记的方法，其特征在于，包括以下步骤：

①黄瓜白粉病感病品种S94(♀)和黄瓜白粉病抗病品种S06(♂)杂交，得到杂种F₁；

②由杂种F₁自花授粉获得子代，通过子代单粒传方法获得F₇代的重组自交系；

③分离每个重组自交系单株黄瓜叶片的DNA，进行PCR扩增；

④基于遗传连锁交换定律，对分子标记分析资料构建黄瓜遗传连锁图；

⑤接种白粉病病原菌，接种12d后开始调查发病情况，用于统计分析和QTL定位；

⑥将重组自交系每个家系的白粉病抗性与黄瓜遗传连锁图中的分子标记进行连锁和QTL分析，以2.5为LOD阈值，大于2.5说明存在一个QTL位点，确定与抗源S06白粉病抗性主效QTL连锁的分子标记F、CSEPGN11、e23m18f和ME11EM9c。

2.根据权利要求1所述的黄瓜白粉病抗性主效QTL紧密连锁分子标记的方法，其特征是，步骤③中所述的PCR扩增，其扩增产物电泳分离后，获得分子标记资料。

3、根据权利要求1所述的黄瓜白粉病抗性主效QTL紧密连锁分子标记的方法，其特征是，步骤③中所述的分离每个重组自交系单株黄瓜叶片的DNA，采用引物TTAACTACTTCGGACGGGCATAG和AGGTGTTCAGCAAACATAGGGTG；GGAAGTTTGGCTTTGGGAT和TGGAGTACACAGTGGGGGAA；GACTGCGTACCAATTCT和GATGAGTCTAGAACGGCT；TGAGTCCAAACCGGTCT和GACTGCGTACGAATTGAT；进行PCR扩增，扩增产物在1.5％琼脂糖凝胶和6％聚丙烯酰胺凝胶上电泳分离后，分别获得分子标记F、CSEPGN11、e23m18f和ME11EM9c。

4、根据权利要求3所述的黄瓜白粉病抗性主效QTL紧密连锁分子标记的方法，其特征是，所述的琼脂糖凝胶，是指：100ml TAE溶液中含有1.5克琼脂糖。

5、根据权利要求3所述的黄瓜白粉病抗性主效QTL紧密连锁分子标记的方法，其特征是，所述的聚丙烯酰胺凝胶，是指：100ml聚丙烯酰胺凝胶溶液中含有5.7克丙烯酰胺和0.3克甲叉双丙烯酰胺。

6、根据权利要求1所述的黄瓜白粉病抗性主效QTL紧密连锁分子标记的方法，其特征是，步骤⑤所述的用于统计分析和QTL定位，是指：以第1片真叶感病面积10％为梯度，病情级别划定分级，根据病情分级结果，计算出每个家系的病情指数DI，家系三次重复的DI的平均值用于统计分析和QTL定位。

7、一种应用如权利要求1所述的黄瓜白粉病抗性主效QTL紧密连锁分子标记的方法，其特征是，包括以下步骤：

a)以S06及其衍生品种或品系为父本或母本与其他黄瓜杂交并繁衍至F₂代以上；

b)对通过步骤a)获得的黄瓜单个植株，分离叶片DNA，检测分离的DNA中是否存在与白粉病主效QTL相连锁的分子标记。

8、根据权利要求7所述的黄瓜白粉病抗性主效QTL紧密连锁分子标记的方法的应用方法，其特征是，所述的S06及其衍生品种或品系，是指以S06为亲本，通过常规杂交、或采用组织培养、或采用组织培养、或采用花药培养、或用别的物理或化学方法杂交诱导单倍体，再用秋水仙素加倍获得双单倍体或采用遗传转化方法获得的黄瓜品种或品系。

9、根据权利要求7或者8所述的黄瓜白粉病抗性主效QTL紧密连锁分子标记的方法的应用方法，其特征是，将F、CSEPGN11、e23m18f和ME11EM9c分子标记用于所述的S06及其衍生品种或品系的基因型检测，以判断该品种或品系是否具有白粉病抗性。