[发明专利]一株农杆菌及其用于制备左旋内酯化合物的方法

权利要求书

1.一株产右旋内酯水解酶的农杆菌(Agrobacterium radiobacter)，保藏号为CGMCC 2371。

2.一种如权利要求1所述的农杆菌CGMCC 2371在制备手性羟基酸中的应用。

3.如权利要求2所述的应用，其特征是包括如下步骤：

(1)将所述的农杆菌CGMCC 2371在含有碳、氮、磷及无机盐的培养基中进行发酵，获得培养物；

(2)将细胞培养物直接或经过处理后作为催化剂，对映选择性催化外消旋内酯中右旋体的水解，然后通过常规的有机溶剂萃取等方法分离提取未被水解的左旋内酯以及右旋内酯水解后所生成的左旋羟基酸；

所述的内酯底物是β-丁内酯、α-羟基-γ-丁内酯、α-羟基-β，β-二甲基-γ-丁内酯或β-羟基-γ-丁内酯中的任一种。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的培养基的组成和浓度(g/L)如下：糊精10～30、甘油5～20、蛋白胨1～20和酵母膏1～20。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，培养条件为：

pH 6～9，温度25～37℃，基于发酵培养基体积的接种量为1～10％(v/v)，培养时间12～48h。

6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的内酯底物的浓度为1～40％(w/v)，基于内酯底物重量的催化剂使用量为0.5～10克细胞/克内酯或0.1～75U/克内酯，反应温度为25～40℃，pH 4.0～9.0，反应时间为0.1～24h；

所述的内酯酶活力单位(U)是：在10mL含有2％(w/v)泛解酸内酯的水相反应体系中，加入生物催化剂，在30℃，磁力搅拌条件下滴加0.1M的NaOH，维持反应液pH为7.0，测定消耗100μl NaOH溶液所需的时间；在上述条件下，每分钟催化1μmol泛解酸内酯水解为对应羟基酸所需的催化剂(酶)量定义为1个活力单位(U)。

7.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的内酯底物为(±)-泛解酸内酯。

8.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的催化剂为下列形式中的任意一种：

(1)将农杆菌CGMCC 2317进行液体或固体培养后通过离心收集到的菌体；

(2)采用超声破碎/高压匀浆等方法将菌体破碎，再用水或缓冲液抽提所得的无细胞提取液；

(3)固定化的细胞或固定化的酶。