[发明专利]通过酶联免疫吸附方法检测小分子RNA芯片的方法

权利要求书

1.一种检测RNA样品中待测miRNA的方法，其特征在于，所述方法包括：

(a)将RNA样品加样于miRNA芯片，所述miRNA芯片上固定有对应于待测miRNA的探针，所述RNA样品携带酶联免疫可检测信号；从而使得待测核酸样品中的miRNA与miRNA芯片上相应的探针结合，在芯片上形成“酶联免疫可检测信号-miRNA-探针”复合物；和

(b)利用酶联免疫法检测“酶联免疫可检测信号-miRNA-探针”复合物中的酶联免疫可检测信号，从而确定RNA样品中待测miRNA的存在与否以及存在的量。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的酶联免疫可检测信号是生物素。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(b)包括：

(b1)用所述酶联免疫可检测信号的偶联物与“酶联免疫可检测信号-miRNA-探针”复合物反应，所述酶联免疫可检测信号的偶联物是亲和素，且该偶联物上携带酶标记物；从而在芯片上形成“酶标记物-偶联物-酶联免疫可检测信号-miRNA-探针”复合物；和

(b2)利用所述酶标记物对应的底物与“酶标记物-偶联物-标记物-miRNA-探针”复合物反应，从而确定待检测样品中待测miRNA的存在与否以及存在的量。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的酶标记物选自：辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶。

5.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的酶标记物对应的底物选自：用于碱性磷酸酶的对硝基苯磷酸酯或5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸/硝基四氮唑蓝；或用于辣根过氧化物酶的邻苯二胺或四甲基联苯胺或2，2’-连氮-双-〔3-乙基苯并噻唑啉磺酸〕。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，以碱性磷酸酶作为酶标记物且以5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸/硝基四氮唑蓝作为底物，并且，5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸/硝基四氮唑蓝与“酶标记物-偶联物-酶联免疫可检测信号-miRNA-探针”复合物的反应时间是15-120分钟。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的miRNA芯片上的探针从5’到3’依次含有：氨基-(A)_n-与miRNA互补的核苷酸序列；

其中，n＝5-20。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，miRNA芯片上，探针的点样浓度是0.7-47μM。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，携带酶联免疫可检测信号的RNA样品的制备方法如下：用高碘酸钠氧化RNA的3’端邻羟基为双醛基，再用酶联免疫可检测信号进行标记。

10.一种检测待测miRNA的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有：

miRNA芯片，所述miRNA芯片上含有对应于待测miRNA的探针；

酶联免疫可检测信号分子；和

识别酶联免疫可检测信号分子的酶联免疫试剂。