[发明专利]重组蛋白的变复性方法

权利要求书

1.一种从包涵体蛋白制备可溶性蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括：

(a)用第一变性剂溶液溶解包涵体蛋白，从变性液中提取纯化出经一次变性的蛋白；其中，所述的第一变性剂溶液含精氨酸；

(b)对(a)获得的经一次变性的蛋白进行二次变性，获得含有经二次变性的蛋白的变性液；和

(c)对(b)获得的变性液进行复性，分离获得可溶性蛋白。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(a)中，所述的从变性液中提取纯化出经一次变性的蛋白的方法是：

(a1)将变性液离心，取上清液；和

(a2)采用蛋白等电点沉淀法从(a1)获得的上清液中提取纯化出经一次变性的蛋白。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(a2)中，所述的蛋白等电点沉淀法包括：

(i)将(a1)获得的上清调节至比蛋白等电点PH值高0.5-3的PH值，离心取上清液；和

(ii)将(i)获得的上清液调节至蛋白等电点PH值±0.3的PH值，离心取沉淀，该沉淀即为纯化出的经一次变性的蛋白。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的蛋白选自：绿色荧光蛋白，日本血吸虫弹性蛋白酶，人HSPC067蛋白，或肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的第一变性剂溶液还含有：Triton。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的第一变性剂溶液含有：0.5±0.2mol/L精氨酸、1±0.2mmol/L EDTA，1±0.8％(v/v)Triton，和50±20mmol/L NaCl。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的二次变性采用第二变性剂溶液，该溶液含有选自下组的成分：尿素，盐酸胍，十二烷基磺酸钠，或脱氧胆酸钠。

8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的第二变性剂溶液含有：尿素，EDTA，β-巯基乙醇，Tris-HCL，和NaCl。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，复性所用的复性液含有：EDTA，还原型谷胱苷肽，氧化型谷胱苷肽，和Tris-HCL。

10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(c)中，复性后，对复性液进行超滤或透析，分离获得可溶性蛋白。