[发明专利]用毕赤酵母表达系统制备抗人乳头瘤病毒18型感染的疫苗的方法

权利要求书

1. 一种利用毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统制备重组人乳头瘤病 毒18型L1蛋白的方法，其包括将优化设计的HPV 18 L1基因克隆至表达载 体，转化毕赤酵母菌株，培养转化体，获得重组的HPV 18 L1蛋白；其中， 所述的优化设计的HPV 18 L1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5或SEQ ID NO.6所示。

2. 根据权利要求1所述的方法，其特征是，所述的表达载体选自质粒 pPICZ、pPIC6、pGAPZ和pAO815。

3. 根据权利要求1所述的方法，其特征是，所述的转化用电转化或原 生质体转化。

4. 根据权利要求1所述的方法，其特征是，所述的毕赤酵母菌株选自 毕赤酵母X-33、GS115、KM71和SMD1168菌株。

5. 根据权利要求1所述的方法，其特征是，将所述的优化设计的HPV 18 L1基因克隆至质粒pPICZ，得到重组表达质粒，然后电转化毕赤酵母X-33 株，筛选得到基因工程菌，经发酵培养，破菌、离心、柱层析纯化得到重组 的HPV 18 L1蛋白。

6. 根据权利要求5所述的方法，其特征是，所述的柱纯化包括采用 POROS 50 HS柱层析初纯，再经过CHT柱层析精纯。

7. 根据权利要求1所述的方法，其特征是，所述的重组的HPV 18 L1 蛋白能在毕赤酵母体内自组装成病毒样颗粒。

8. 一种制备抗人乳头瘤病毒18型感染的疫苗的方法，其特征是，包括 采用权利要求1～7任一项所述的方法制备重组人乳头瘤病毒18型L1蛋白病 毒样颗粒，然后加入药学上可用的疫苗佐剂。

9. 根据权利要求8所述的方法，其特征是，所述的药学上可用的疫苗 佐剂为铝佐剂。