[发明专利]从杜仲中提取环烯醚萜活性部位及单体的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种对杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)中环烯醚萜(iridoids)类化合物及其活性单体京尼平甙酸(geniposidic acid，GPA)、京尼平甙(geniposide，GP)及桃叶珊瑚甙(aucubin，AU)进行制备的方法。

背景技术

杜仲为我国特有的杜仲科杜仲属多年生落叶乔木，是一种名贵的中药材，具有补肝肾、强筋骨、安胎和降压作用。杜仲中化学成分十分复杂，其中最具有开发前景的活性部位之一的就是环烯醚萜类化合物，包括京尼平甙酸(GPA)、京尼平甙(GP)及桃叶珊瑚甙(AU)等，它们存在于杜仲皮、杜仲叶和杜仲籽(翅果)中。已有研究表明，环烯醚萜类化合物具有防治高血压、提神、抗疲劳、增强免疫功能、抗肌肉骨骼老化、防癌抗癌、利肝保胆、预防性功能低下、增强记忆等优异功效。特别是其高纯单体GPA及AU等对血压有双向调节作用，而且疗效平稳、无副作用、持续时间长，所以杜仲已被日本健康与福利部确认为一种具有预防高血压作用的特殊食品。日本的许多药品制剂已将GPA、GP等的含量作为质量控制指标，它们还被用作生化、医药研究的重要试剂。但我国目前尚无生产GPA、AU的厂家，所需均靠进口，价格昂贵。

杜仲成分复杂，很多化合物结构和性质相近，因此，活性成分的提取分离较为困难。目前国内外对杜仲环烯醚萜类化合物的研究，一般采用传统的提取工艺，经萃取、沉淀、反复硅胶柱层析或氧化铝柱层析等方法纯化得少量纯品。存在产率低、工艺复杂、操作繁琐、成本高等不足，未见有适宜较大规模生产的研究报道。虽然国内杜仲产品品种多，但科技含量低，加工技术粗糙，多是在低水平重复，对原材料的综合利用率低(如叶的利用率不到三十分之一)。

以往的研究未能提供一种获得杜仲环烯醚萜活性部位的可行的方法，对于从杜仲各种不同原料(特别是叶、籽)中同时提取分离得到多种环烯醚萜单体的方法，也尚未见报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从杜仲中提取环烯醚萜活性部位及同时制备出GPA、GP、AU三种单体的方法。它以杜仲为原料，采用常规浸提法或超声波提取法或微波提取法对原材料进行提取，以溶剂萃取或特种吸附剂吸附分离等方法对提取液进行初步纯化，得到环烯醚萜活性部位(含量不低于50％)，运用制备高效液相色谱技术对GPA、GP、AU进行分离制备，得到以上三种单体产品，含量均不低于90％。

为达到上述目的，本发明的实施方案为：一种从杜仲中提取环烯醚萜活性部位及单体的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将杜仲原料粉碎，加入醇-水溶液，采用加热浸提或超声波提取或微波提取，得提取液，过滤、浓缩，浓缩液用盐酸、硫酸或硝酸调至pH1.5-4.5，所用醇为甲醇、乙醇或丙醇；

(2)将浓缩液用有机溶剂萃取，或者用吸附剂吸附，用70％-90％的醇-水溶液洗脱，收集萃取液或洗脱液，浓缩，低温真空干燥，得到环烯醚萜化合物，所述有机溶剂为乙酸乙酯、氯仿、石油醚、乙醚、正丁醇或异戊醇，所述吸附剂为大孔吸附树脂、聚酰胺、活性碳、硅胶或葡聚糖凝胶，所述醇为甲醇、乙醇或丙醇；

(3)运用高效液相制备色谱技术进行分离，所使用的柱填料为C₁₈或C₈，粒径为5-50μm，采用醇-水体系为流动相进行梯度洗脱，分别收集GPA、GP、AU馏分，所述梯度洗脱为台阶梯度洗脱方式，即先采用15-25％的醇-水体系为流动相洗脱，在35-50min时段收集组分AU，继续洗脱至60min，开始收集GPA组分至洗脱时间为80min，然后换用35-50％的醇-水体系为流动相，洗脱至110min开始收集GP组分至125min，所用醇为甲醇、乙醇或丙醇。

(4)将以上馏分分别进行减压浓缩、冷冻干燥，得到粉末状GPA、GP、AU。

本发明采用原料为杜仲鲜干皮，陈干皮、陈枝皮、炮制皮、杜仲叶和杜仲籽粕。

步骤(1)中，所述常规浸提法是在室温至90℃条件下，以6-15倍的液固比加入40-80％的醇进行，提取时间为0-3小时，时间延长不限，提取次数为1-3次，次数增加不限。此方法更适应杜仲皮为原料。

步骤(1)中，所述超声波提取法是采用温度为30-60℃条件下，以10-25倍的液固比加入20-70％的醇，在频率为10-80KHz范围内，提取10-40分钟，时间延长不限。重复处理1-3次，次数增加不限。此法相对于常规浸提法，可明显缩短提取时间。此方法更适应杜仲叶为原料。