[发明专利]抑制弓形虫wx2基因表达的siRNA及其应用

权利要求书

1、抑制弓形虫wx2基因表达的siRNA，其特征在于，设计并体外合成以下双链DNA，构建逆病毒表达载体并导入弓形虫体内，获得体内持续表达的siRNA分子，所述双链DNA的碱基序列为：

正义链：

5′-GATCCCCCATCCGTAAAGCGGTGAGTACTCACCGCTTTACGGATGTTTTTA-3′；(SEQ ID NO.5)

反义链：

5′-AGCTTAAAAACATCCGTAAAGCGGTGAGTACTCACCGCTTTACGGATGGGG-3′；(SEQ ID NO.6)

干扰位点为wx2序列的895～913位的19个核苷酸，方框内为为回文结构。

2、根据权利要求1所述的抑制弓形虫wx2基因表达的siRNA，其特征在于，所述siRNA的表达质粒为逆病毒表达载体pSUPER.retro，其分子大小为7196bp。

3、权利要求1所述的抑制弓形虫wx2基因表达的siRNA在筛选弓形虫减毒活疫苗中的应用，其特征在于，首先构建干扰质粒，经电穿孔法导入弓形虫体内，筛选有效的RNA干扰虫株，通过动物攻击实验检验其干扰效果，进而利用筛选到的干扰虫株开发家畜和宠物用弱毒或减毒活疫苗。

4、根据权利要求5所述的抑制弓形虫wx2基因表达的siRNA在筛选弓形虫减毒活疫苗中的应用，其特征在于，干扰虫株的筛选方法为：采用细胞内筛选和细胞外低温筛选结合的方法，首先在3μg/ml嘌呤霉素条件下、于L929细胞内培养8天，转到4μg/ml嘌呤霉素条件下、于4℃细胞外选择8天，然后在4μg/ml嘌呤霉素条件下、于L929细胞内选择培养5天。