[发明专利]一种葛根芩连药物的有效成分的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及中药的质量控制方法，具体涉及葛根芩连药物的质量控制方法。

背景技术

葛根芩连汤原载于东汉张仲景《伤寒论》中，由葛根、黄芩、黄连、甘草4味药用水煎煮制成，为“解表清里之剂”，具有解表清里之功，主治身热下利，胸脘烦热口中作渴，喘而汗出的病证。近年来国内外医学家通过实验研究证明葛根芩连汤具有解热、抗菌、抗病毒、解痉、抑制胃肠运动、抗缺氧、抗心律失常、增强机体免疫功能等药理作用，是临床上用于治疗菌痢、肠伤寒、急慢性胃肠炎、婴幼儿腹泻等疾病的常用方剂。近年来国内已开发出了葛根芩连片、葛根芩连微丸、颗粒剂、散剂、微粉、葛根芩连胶囊以及葛根芩连合剂、口服液等剂型。

葛根、黄芩、黄连、甘草品种较多、产地、采收季节等均会影响中药材的质量，制备的工艺种类较多，制成的制剂难于确保其疗效的一致性。因此，有必要对葛根芩连制剂有效成分的组成和含量进行严格的质量控制。

在现阶段已知葛根芩连相关药味含有葛根素、大豆苷、大豆苷元、芒柄花苷、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、药根碱、甘草苷、甘草酸、甘草次酸等多种成分，但是目前常用的葛根芩连药物的质量控制方法大多数是分别检测药物中的各种成分，如《中国药典》记载的葛根芩连片、葛根芩连微丸的质量控制方法是采用高效液相方法(HPLC)以葛根素和黄芩苷为指标分别进行含量测定，对其质量进行控制。

采用高效液相色谱分别检测葛根芩连药物中的有效成分的组成和含量，可以准确地检测出葛根芩连药物中单成分的含量，但是如果每个有效成分都分别用高效液相色谱来检测，工作量将十分大。因此，已有不少学者开始研究葛根芩连药物多成分同时测定的方法，陈丽红等人采用反相高效液相色谱法-二极管阵列检测器，以甲醇-水(内含1％三乙胺、1％乙酸，用磷酸调pH至3)为流动相，对中药复方制剂葛根芩连配方颗粒中3种主要标志性成分的含量同时分析测定，并采用相同的流动相对其指纹图谱进行研究。实验结果显示，3种主要标志性成分葛根素、黄芩苷和小檗碱在含量分析测定条件下，各成分分离良好，相关系数均为0.9999，线性范围分别为0.042～1.05μg、0.13～3.25μg和0.060～1.50μg，加样回收率在95％～106％之间；在指纹图谱研究中，以黄芩苷为参照物峰，标定了32个共有峰，分析的11批葛根芩连配方颗粒与共有模式之间具有良好的相似性，相似度均在0.9以上(陈丽红等.葛根芩连配方颗粒标志性成分含量分析及指纹图谱研究。分析化学2006年第8期1109～1112)。龚湛文等人采用HPLC以乙腈-水(含0.5％KH₂PO₄)作为流动相系统可同时鉴别14种成分，并测定其中黄芩苷、葛根素2个成分的含量(龚湛文，葛根芩连抗病毒有效物质基础研究，北京中医药大学硕士学位论文，2003年5月)。目前尚未有能同时检测葛根芩连药物中6种成分含量的检测方法。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种能同时对葛根芩制剂6种成分定量检测的高效液相色谱方法。

本发明解决上述技术问题的技术方案是：

一种葛根芩连药物的有效成分的检测方法，该方法是利用多波长高效液相色谱法检测葛根芩连中的各种有效成分，具体的步骤是：

(1)配制待检进样液：取葛根芩连药物用溶剂配制成含药物0.2mg～2mg/ml的待检进样液；

配制混合对照品溶液：取葛根素、大豆苷、黄芩苷、汉黄芩苷、巴马汀和小檗碱混合后用溶剂配制成各成分浓度均为1～200μg/ml的对照品溶液；

然后将待检进样液和混合对照品溶液分别按以下方法进行高效液相色谱检测：

按进样量为1～20gl对以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱进样，控制柱温10～40℃，接着用由A相和B相组成的流动相以0.3～1.5ml/min的流速并按表1的程序进行梯度洗脱，同时采用检测波长为248～256nm、274～285nm和344～350nm的紫外光检测洗脱液，获得被检药物以及对照品的高效液相色谱图谱；

                                表1

(2)所得混合对照品溶液的高效液相图谱中左起第2锋至第7峰依次为葛根素、大豆苷、黄芩苷、汉黄芩苷、巴马汀和小檗碱；将被检药物的高效液相图谱与对照品溶液所得的图谱比较，与混合对照品溶液图谱中相应成分的保留时间相同的峰即是与该成分相同物质的特征峰，并根据峰面积按外标法计算含量；

上述步骤中，