[发明专利]一种检测ADPRT基因多态性的检测方法及试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种基因检测方法，特别涉及一种检测ADPRT基因多态性的检测方法及该方法的试剂盒。

背景技术

肿瘤的发生和演变是环境因素和遗传因素之间相互影响的多阶段、多步骤作用过程。从宏观方面来看，此过程体现了环境与宿主，尤其是与宿主的遗传因素相互作用的过程；而从微观方面来看，肿瘤的发生实质上反映致癌因素对细胞遗传物质的影响和作用结果。研究表明在相同环境下生活的人中，有人罹患癌症，有人却安然无恙，即使在一些肿瘤高发地区，肿瘤的实际发病率也仅仅在0.1～0.2％左右。多年来，在肿瘤病因学的研究中，已经积累了大量的资料，说明遗传因素在肿瘤的发生中起着不可忽视的重要作用，最早发现癌症可能与遗传有关的证据来自于流行病学，早期的调查发现，在上一辈或同胞亲属中有癌症患者的人中，癌症的发病率较没有这种家族历史的人更高一些，这进一步提示，至少有一些肿瘤是与遗传直接相关的。

同样接触条件下，肿瘤个体易感性却不同。肿瘤易感性影响因素主要是代谢酶表达差异、DNA修复能力不同以及原癌基因或抑癌基因表达异常。肿瘤的发生是环境因素作用于遗传物质如DNA导致DNA损伤的结果，所以损伤修复，特别是DNA损伤修复具有重要意义。而个体DNA修复能力与其DNA修复基因有密切关系，研究表明人群DNA修复基因有不同的多态性，可表现为不同的遗传性状。

基因多态性是指如碱基替换、切除/插入和基因复制/切除等引起的DNA序列变异，它们可导致蛋白功能和表现型的改变。绝大多数的基因多态性位于非编码区，因而没有明显的作用；但是基因多态性如果发生在基因编码区-外显子的内部，那么在这一位点就可能发生氨基酸的替换并导致蛋白质活性不同程度的改变；启动子区的多态性可改变转录的速度，位于内含子和外显子边界的多态性可致转录产生错误的mRNA片断，从而合成不完全或者没有活性的蛋白。以整段基因切除为特点的多态性可导致功能酶活性的丧失，如谷胱甘肽-S-转移酶M1(GSTM1)空白等位基因；而整段基因复制的多态性则使编码蛋白产生更高水平的酶活性。单核苷酸多态性(SNPs)可导致同义或者非同义氨基酸替换的增加。同义替换是指一个氨基酸被一个不同但是相似的氨基酸所替换，因为相似氨基酸由相关的密码子编码，蛋白质的活性不易发生改变；所以随机的同义碱基的改变会对蛋白质产生最小的突变效应，对人体的危害也较小；而非同义SNPs(化学特性不同的氨基酸的替换)可能会对人体产生有害的效应。

ADPRT则在DNA损伤修复过程中发挥着直接而重要的作用。ADPRT基因位于人1号染色体，全长47286bp，共有23个外显子和22个内含子，其中第17外显子的762密码子是较常见的与肿瘤易感性相关的基因多态位点，ADPRT第762位密码子T→C的SNP位点为非同义SNP，可引起第762位氨基酸由Val变成Ala，可能影响具有重要修复功能的ADPRT蛋白的功能。研究显示ADPRT Ala762Ala基因型可使亚洲人和高加索人群的ADP核糖基转移酶活力下降40％，ADPRT酶活力降低与肿瘤危险性增加有关，中国人群ADPRT Val762Ala多态与食管鳞状上皮细胞癌、胃贲门癌和吸烟相关肺癌的发生相关。携带ADPRT Ala762Ala基因型的高加索人患前列腺癌的风险明显增加，并且其危险度与携带突变基因的个数相关。

近年来，人们发展了许多用于检测基因多态性的方法，较常见的有单链构象多态技术(SSCP)、直接测序技术、变性一高压液相色谱(DHPLC)、动态等位基因特异杂交技术(DASH)和TagMan技术等，其中很多方法在进行高通量检测方面有着非常明显的优势，但由于仪器昂贵、要求有相应的技术平台支持，检测成本相对也较高，并不适用于小样本已知位点的突变检测。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中的不足之处，提供一种用于检测ADPRT基因多态性，操作简单、特异性高，重复性好，可直接确定突变的部位和性质，能节约大量的样本、经费和时间的检测方法及试剂盒。

为了达到上述目的，本发明采用以下方案：

一种检测ADPRT基因多态性的检测方法，其特征在于该检测方法包括以下步骤：

a、以人基因组DNA为模板，在ADPRT基因位点所在区域设计基因序列正、反向引物，通过单碱基错配在正向引物引入一个酶切位点，并对模板基因组DNA进行特异性PCR扩增；

b、利用限制性内切酶对其进行酶切；

c、根据琼脂糖凝胶电泳对上述ADPRT基因进行片段大小分离，确定其基因多态性；