[发明专利]一种检测ADPRT基因多态性的检测方法及试剂盒

权利要求书

1、一种检测ADPRT基因多态性的检测方法，其特征在于该检测方法包括以下步骤：

a、以人基因组DNA为模板，在ADPRT基因位点所在区域设计基因序列正、反向引物，通过单碱基错配在正向引物引入一个酶切位点，并对模板基因组DNA进行特异性PCR扩增；

b、利用限制性内切酶对其进行酶切；

c、根据琼脂糖凝胶电泳对上述ADPRT基因进行片段大小分离，确定其基因多态性；

其中所述的ADPRT基因位点为Val762A1a(rs1136410)，所述的正向引物为：5’-TTTTGCTCCTCCAGGCCAAC*G-3’(*前的碱基为引入的错配碱基以创造酶切位点)；所述的反向引物为：5’-CCTGACCCTGTTACCTTAATGTCAGTTTT-3’。

2、根据权利要求1所述的检测方法，其中步骤a中所述的PCR扩增为在25μl反应体系下，94℃预变性5min后，进行30个如下循环扩增：94℃变性40s，57℃退火40s，72℃延伸35s，最后72℃延伸5min。

3、根据权利要求2所述的检测方法，其中所述的25μl反应体系包括：1U Taq DNA聚合酶，10×Buffer 2.5μl，25mol/L MgCl₂ 2μl，2.5mmol/L dNTPs 2.5μl，50ng人基因组DNA，10μmol/L上下游引物各1μl，由灭菌超纯水补足25μl。

4、根据权利要求1所述的检测方法，其中步骤b中所述的限制性内切酶为20μl Bsh1236I酶切体系，所述的20μl Bsh1236I酶切体系包括：10μl的PCR扩增产物，10U/μl的Bsh1236I限制性内切酶1μl，10×缓冲液2μl和7μl灭菌超纯水。

5、一种检测ADPRT基因多态性的试剂盒，该试剂盒包括扩增用的基因特异性引物、dNTPs、用于PCR反应的DNA聚合酶及其缓冲液，用于RFLP的限制性内切酶Bsh1236I和相应的缓冲液。

6、根据权利要求5所述的试剂盒，该试剂盒包括：

正向引物为：5’-TTTTGCTCCTCCAGGCCAAC*G-3’；

反向引物为：5’-CCTGACCCTGTTACCTTAATGTCAGTTTT-3’；

1U Taq DNA聚合酶；

10×Buffer 2.5μl；

25mol/L MgCl₂2μl；

2.5mmol/L dNTPs 2.5μl；

10μmol/L上下游引物各1μl。

10单位Bsh1236I酶；

2μL的酶切缓冲液。