[发明专利]孔雀石绿残留的酶联免疫检测试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.一种孔雀石绿残留的酶联免疫检测试剂盒，其特征在于包含下列成分：

(1)包被了孔雀石绿抗原的酶标板；

(2)酶标记孔雀石绿抗体工作液；

(3)孔雀石绿标准溶液；

(4)底物液；

(5)底物缓冲液；

(6)反应终止液；

(7)浓缩洗涤液；

(8)样品稀释液。

2.根据权利要求1所述的酶联免疫检测试剂盒，其特征在于所述酶标板采用96孔或40孔酶标板，包被有能与抗孔雀石绿抗体特异结合的孔雀石绿抗原，并封闭微孔表面未吸附孔雀石绿抗原的位点；所述孔雀石绿抗原是采用重氮化法将孔雀石绿半抗原与载体蛋白进行偶联得到。

3.根据权利要求1所述酶联免疫分析试剂盒，其特征在于所述所述酶标记孔雀石绿抗体工作液为采用戊二醛法或过碘酸盐氧化法将标记酶与孔雀石绿抗体进行偶联得到；所述标记酶为辣根过氧化物酶或细菌提取的碱性磷酸酯酶。

4.根据权利要求3所述酶联免疫分析试剂盒，其特征在于所述孔雀石绿抗体为鼠单克隆抗体、兔多克隆抗体或基因工程抗体任意一种。

5.根据权利要求1所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于当标记酶为辣根过氧化物酶时，所述底物液为含有3，3，5，5-四甲基联苯胺或邻苯二胺的pH5.0磷酸-柠檬酸缓冲溶液，所述底物缓冲液为含有过氧化氢或过氧化脲的pH5.0磷酸-柠檬酸缓冲溶液，所述终止液为1～2mol/L硫酸溶液或2mol/L的氢氧化钠溶液；

当标记酶为细菌提取的碱性磷酸酯酶时，所述底物液为对硝基磷酸盐缓冲液，所述底物缓冲液为含有过氧化氢或过氧化脲的pH5.0磷酸-柠檬酸缓冲溶液，所述终止液为1～2mol/L硫酸溶液或2mol/L的氢氧化钠溶液。

6.根据权利要求1所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于所述浓缩洗涤液为含0.5～1.5％吐温20的磷酸盐缓冲液，磷酸盐缓冲液pH7.4，浓度为0.1mol/L。

7.根据权利要求1所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于所述样品稀释液为含0.05％吐温20的0.01mol/L磷酸盐缓冲液，磷酸盐缓冲液pH7.4。

8.根据权利要求1所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于所述孔雀石绿标准溶液的浓度分别为：8.1μg/L、2.7μg/L、0.9μg/L、0.3μg/L、0.1μg/L和0μg/L。

9.一种权利要求1所述的酶联免疫检测试剂盒的使用方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)样品前处理；

(2)使用试剂盒进行检测；

(3)结果处理与分析。

10.根据权利要求9所述方法，其特征在于步骤(2)包括以下步骤：

(1)将试剂盒从冷藏环境中取出，置于室温平衡；

(2)将标准品或待测样品加入已经包被有孔雀石绿抗原的酶标板孔内，然后每孔加入酶标记物，轻拍混匀，孵育；

(3)洗涤；

(4)每孔加入等量的底物缓冲液与底物液，轻拍混匀，避光孵育；

(5)每孔加入反应终止液，混合均匀，在波长450nm或492nm下，以空气为空白，酶标仪测定各孔吸光值。