[发明专利]透明质酸接枝聚乙烯亚胺共聚物、制备方法及其作为基因载体的应用

权利要求书

1.一种阳离子接枝共聚物，由聚乙烯亚胺共价连接在主链透明质酸二糖单元中被氧化的2位和3位上共聚而成。

2.根据权利要求1所述的共聚物，其特征在于，聚乙烯亚胺与透明质酸摩尔比例为1∶20-2∶1，透明质酸的分子量范围为5000道尔顿～150万道尔顿，聚乙烯亚胺的分子量范围为600～70,000道尔顿。

3.根据权利要求1或2所述的共聚物的制备方法，其特征在于包括下列步骤：

a.将透明质酸溶于适当溶剂中，加入一定摩尔比例的氧化剂，在规定时间内搅拌反应，加入中止剂停止反应。再将反应溶液在适当透析液中透析，干燥即得氧化透明质酸；

b.将聚乙烯亚胺与氧化透明质酸溶于适当溶剂中，搅拌反应一定时间。反应结束后，用还原剂处理溶液，将碳氮双键还原为单键。将反应溶液在适当透析液中透析，干燥即得最终产物透明质酸接枝聚乙烯亚胺共聚物。

4.根据权利要求3所述的共聚物的制备方法，其特征在于，

a.所使用的氧化剂为高碘酸或高碘酸盐；透明质酸与氧化剂的摩尔比例范围为1∶0.1～1∶5；反应时间范围为3～72h；反应温度范围为-4℃～37℃；反应中止剂为能够清除剩余高碘酸或高碘酸盐的物质如乙二醇；透析液为水溶液或无机盐溶液；干燥采用冷冻干燥法；

b.聚乙烯亚胺与氧化透明质酸反应时间为3～72h；反应温度范围为-4℃～37℃；还原剂为硼氢化钠；透析液为水溶液或无机盐溶液；干燥采用冷冻干燥法。

5.根据权利要求1所述的共聚物作为基因载体的应用。

6.根据权利要求1所述的共聚物与含报告基因、抗癌基因、细胞因子基因的能在真核细胞中重组表达的质粒DNA形成的复合物。

7.根据权利要求6所述的共聚物与质粒DNA形成的复合物，其特征在于，复合物粒径小于2μm。

8.根据权利要求6所述的共聚物与质粒DNA形成的复合物的制备方法：

将共聚物和质粒DNA分别用适当溶剂溶解成一定浓度的溶液，按共聚物载体与质粒DNA的一定质量比取两种溶液混合，静置一段时间后，载体和质粒DNA通过静电自组装形成复合物溶液。

9.权利要求8所述的方法，其特征在于溶解共聚物和质粒DNA的溶媒为磷酸盐缓冲液、HEBS(4-羟乙基哌嗪乙磺酸)缓冲液、氯化钠溶液或葡萄糖溶液；共聚物和质粒DNA溶液的浓度范围为：0.1～10mg/ml；载体与质粒DNA的质量比例范围为：0.05～60；载体和质粒DNA组装成为复合物所需的静置时间范围为0.5～2h。

10.根据权利要求6所述的共聚物与质粒DNA形成的复合物在转染细胞中的应用，用途在于可成功转染人体以及动物来源的内皮细胞、上皮细胞以及多种肿瘤细胞等。

11.根据权利要求6所述的共聚物与质粒DNA形成的复合物在制备治疗相应疾病药品中的应用，该复合物的给药途径包括：注射、口服和粘膜给药，应用于肿瘤等疾病的基因治疗。