[发明专利]一种液体发酵培养富硒、锌元素的金针菇菌丝体的方法

权利要求书

1.一种液体发酵培养富硒、锌元素的金针菇菌丝体的方法，其特征是将金针菇孢子接种至新鲜的固体斜面上进行培养，待斜面长好后接种至含较低浓度无机硒与无机锌的液体培养基中进行种子的培养，即对菌种加以驯化；再接入添加了适量硒元素、锌元素的发酵培养基中进行深层液体发酵培养，利用金针菇菌的富集与转化功能，使丝体中积累高浓度的有机硒和有机锌。发酵结束后，通过对菌体的收集、烘干、粉碎，得到同时富含有机硒元素、有机锌元素的金针菇菌丝体粉。

步骤为：

1)待用菌种的培养：

出发菌株为金针菇(Flammulina Valutipes)F12；

①斜面培养：

培养基配方以g/L计：麸皮40，蔗糖20，磷酸二氢钾3.0，硫酸镁1.5，琼脂20.0，pH自然；

培养方法：将保存在木屑上的菌种接种到新鲜的空白斜面上，在26±1℃下培养7-10天；

②一级摇瓶种子培养，装液量150mL/500mL：

培养基配方以g/L计：葡萄糖20，黄豆粉10，玉米粉25，磷酸二氢钾1.0，硫酸镁0.5和维生素B₁0.05，pH自然；

培养方法：将培养好的斜面接种至事先灭菌的摇瓶中，在26±1℃，转速110rpm下培养7天；

③二级摇瓶种子培养，装液量400mL/1000mL：

培养基配方：与一级摇瓶种子培养基配方相同；

培养方法：将培养好的一级种子以10％的接种量接种至事先灭菌的摇瓶中，在26±1℃，转速110rpm下扩大培养2天，即成待用菌种；

2)50L一级液体种子培养，装液量25-30L：

①一级液体种子培养基配方以g/L计：葡萄糖20，黄豆粉10，玉米粉25，麸皮50，麸皮水煮后取水溶性麸皮汁，酵母膏3.0，维生素B₁0.05，硫酸镁0.5，磷酸二氢钾1.0，亚硒酸钠0.01，硫酸锌0.2，豆油2.0，pH自然；

②控制工艺：在0.1Mpa下灭菌30分钟，冷却后按接种量5％-10％接入待用菌种，温度26±1℃，罐压0.05Mpa，通气量1∶0.3，V/V，搅拌转速100rpm；

③转罐标准：发酵时间30-35小时，菌丝球上浮三分之一，镜检有锁状联合，无杂菌；

3〕500L二级液体种子培养，装液量250-300L：

①培养基配方与一级液体种子配方相同：

②控制工艺：在0.1Mpa下灭菌30分钟，冷却后按接种量10％-15％接入一级种子，温度26±1℃，罐压0.05Mpa，通气量1∶0.3，V/V，搅拌转速100rpm，

③转罐标准：发酵时间20-25小时，菌丝球上浮三分之一，镜检有锁状联合，无杂菌；

4〕3000L深层液体发酵培养，装液量1800L：

①发酵培养基配方以g/L计：葡萄糖30，黄豆30，黄豆浸泡后用胶体磨磨浆离心后取汁，玉米粉10，麸皮50，麸皮水煮后取水溶性麸皮汁，维生素B10.05，硫酸镁0.5，磷酸二氢钾1.0，酵母膏3.0，豆油2.0和亚硒酸钠0.05，硫酸锌0.7，pH自然；

②控制工艺：在0.1Mpa下灭菌30分钟，冷却后按接种量10％-15％接入二级种子，温度26±1℃，罐压0.05Mpa，通气量1∶0.3，V/V，搅拌转速100rpm；

③放罐标准：发酵时间40-45小时，pH＞5，平板无杂菌，菌丝球上浮二分之一，镜检有锁状联合，菌丝球不能自溶；

5〕菌丝体的提取：将培养好的发酵液用5000-6000rpm的离心机处理，收集菌丝体；

6〕菌丝体的烘干：将收集的菌丝体用真空干燥箱在50-60℃下烘干；

7〕菌丝体的粉碎：用带冷冻的粉碎机将烘干的菌丝体粉碎至80目以上既得产品。