[发明专利]一种海参皂苷含量的测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种生物活性物质的测定方法，特别是涉及一种海参皂苷含量的测定方法。

背景技术

海参皂苷是海参中一种重要的生物活性物质，目前已发现的海参皂苷有100多种。海参中皂苷类化合物结构复杂，且因海参种类和生长环境的不同而有差别。不同种类的海参中的皂苷结构不同，同一种海参中通常含有几种甚至几十种结构相似、差别细微的皂苷类成分。另外，海参中还含有大量的蛋白质、多糖、脂肪、微量元素等复杂成分，这必然会给海参中皂苷含量的测定带来很多困难。

申请号为200510014471.9的专利中公开了一种苦瓜皂甙的测定方法，该方法对目标测定物的选择性不强，样品中的杂质成分易引起较大的测定误差，通常需要比较复杂的样品前处理过程，而大孔树脂、硅胶等柱层析过程必然会造成样品的损失，易给测定结果带来进一步的误差。申请号为200510013275.X的专利中公开了中药中人参皂苷Rb 1含量的测定方法”，该方法灵敏准确，但同时也存在着前处理复杂的问题，而且该方法通常适用于一种或者少数几种皂苷组分的定量，海参中通常含有十几种甚至几十种皂苷组分，它们结构复杂且差别极小，用高效液相色谱分离也比较困难。另外，海参皂苷在不同种海参间差异大，无法确定一种合适的皂苷单体作为标准品进行分光光度或者液相色谱测定海参中各种皂苷的含量。随着人们生活水平的提高，与海参相关的食品、保健品和药品日益成为市场消费的热点和主流，海参皂苷作为主要的活性成分，其含量对其食用及药用价值影响很大，是不可少的海参营养评价指标，因此迫切需要建立一种简便可行的海参皂苷含量的测定方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种海参皂苷含量的测定方法，它借助海参皂苷中特有的喹诺糖作为定量标准，无需复杂的前处理过程，能准确定量各种海参中皂苷的含量。

一种海参皂苷含量的测定方法，其特征在于有下列步骤：(1)称取海参样品，将样品粉碎或切成小块，置于浓度为2mol/L-2.5mol/L的三氟乙酸水溶液中，在110℃-120℃下水解2-3小时，将水解液中和，过滤，定容，作为供试液；(2)称取喹诺糖，配制成6-8个浓度在0.01mmol/L-1mmol/L之间成浓度梯度的标准水溶液；(3)分别吸取相同体积的上述标准水溶液、1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮衍生剂和0.3mol/L-0.35mol/L氢氧化钠水溶液，在65-70℃下衍生反应25-35min，冷却8-10min，用盐酸水溶液中和；用氯仿萃取，吸弃下层，重复3次，将水层过滤，进行液相色谱分析，以喹诺糖衍生物的峰面积对喹诺糖的浓度进行线性回归，得到标准曲线；(4)取上述供试液进行衍生反应和液相色谱分析，以喹诺糖衍生物的峰面积代入上述标准曲线中求出样品中喹诺糖的含量；喹诺糖的含量乘以转化系数即得海参样品中皂苷的含量。

本发明的优点在于：(1)操作简便，无需对样品进行提取纯化等预处理，可以直接进行水解。(2)灵敏度高，喹诺糖衍生物在250nm有很强的吸收，检测限可以达到0.804μM。(3)取样少，所需海参样品仅为小于1克干重。(4)检测时间短，单个测定耗时仅为3h左右；由于可同时进行水解、衍生等步骤，因此也适用于大批量测定。(5)稳定性好，24小时内喹诺糖衍生物峰面积稳定，RSD＜3.5％。(6)本方法适用于多种海参中皂苷含量的测定。

具体实施方式

下面通过实施例进一步详细说明本发明。

实施例一

(1)称取市售干海参A(刺参)500.8mg，粉碎，加入1mL浓度为2mol/L的三氟乙酸水溶液，于120℃水解2小时，所得水解液以5mo l/L氢氧化钠水溶液中和，过滤，定容至5mL作为供试液。

(2)称取喹诺糖用水配成1mmol/L的溶液作为储备液。进一步依次稀释成0.01mmol/L、0.05mmol/L、0.1mmol/L、0.2mmol/L、0.4mmol/L、0.6mmol/L、0.8mmol/L、1.0mmol/L，制得(8个浓度梯度的标准水溶液。