[发明专利]暗消藤抗肺癌活性提取物及其化合物的制备工艺

说明书

技术领域：

本发明属于医药技术领域，涉及暗消藤抗肺癌活性提取物及其化合物的制备工艺。该提取物及其活性成分均具有抗肺癌活性，用于制备抗肺癌药物。

背景技术：

癌症严重威胁着人类的生命。据世界卫生组织统计，全世界每年死于癌症的患者约500万，肺癌的发病率和死亡率均居癌症之首。西医在治疗肺癌时，主要采取的是手术切除，由于手术不可能绝对彻底地消灭癌细胞，于是必须辅之于化疗或者放疗，但化疗或放疗却存在着在杀死癌细胞的同时，也杀死了大量正常细胞的问题，存在严重的副作用。因此，新型抗肿瘤药物研究势在必行。近年来新抗癌药不断出现，紫杉醇和喜树碱衍生物抗肿瘤治疗作用的证实被誉为90年代抗癌药物研究的重大发现。也使全世界的药物学家将抗癌药物研究的重点放在天然药物研究上。

在前期的研究中，发现萝摩科马莲鞍属植物暗消藤的提取物显示了很强的抑制人肺腺癌A549细胞、纤维肉瘤HT-1080细胞增殖的活性，尤其是在抑制人肺腺癌A549细胞增殖方面，好于5-氟尿嘧啶；同时对正常小鼠初代肝细胞无毒性。通过活性跟踪，对该植物的活性部位化学成分进行研究，分离、纯化、鉴定了18个化合物，其中14个为强心苷类化合物，通过单体的体外活性测试，确定暗消藤中的抗癌活性成分为强心苷类物质。

发明内容：

本发明的目的是提供暗消藤提取物及其制备工艺。暗消藤经适当的工艺处理后得到的提取物及单体化合物，具有治疗肺癌的活性。

暗消藤植物来源为：萝藦科暗消藤Streptocaulon juventas。

本发明的目的是通过如下技术方案实现的：

1.暗消藤药材的提取工艺

(1)暗消藤根粗粉，加X％醇回流提取，提取液减压回收醇至无醇味，浓缩为密度0.80-1.10的浓缩液，得到溶液I备用。

(2)暗消藤根粗粉，加水回流提取，提取液减压浓缩为密度0.80-1.10的浓缩液II，备用。

本发明涉及到暗消藤活性部位的提取方法，其中X％是指醇浓度在1％-100％的醇性溶液，所述的醇指具有以下通式的饱合一元醇或不饱合一元醇：C_nH_2n+1OH或C_nH_2n-1OH(n＜5)。

2.暗消藤中的活性部位的富集工艺

该方案可通过如下(1)-(4)工艺完成，也可以通过(1)-(4)工艺的两个或三个组合实现，如工艺(5)-(16)。

(1)将溶液I或溶液II上样于采用常规方法事先处理好的HPD-100柱(以下的都同样处理好)，用30％，60％，90％乙醇洗脱，得到的60％乙醇洗脱物。

(2)溶液I或溶液II上样于采用常规方法事先处理好的聚丙烯酰胺柱(以下的都同样处理好)，用10％乙醇，95％乙醇洗脱，得到的10％洗脱物。

(3)溶液I蒸干，用热水溶解，分别用乙醚(或氯仿，二氯甲烷等弱极性溶剂)萃取后，正丁醇萃取，得到的正丁醇萃取液。溶液II同法操作制得的正丁醇部分，为暗消藤的活性部位。

(4)溶液I或溶液II蒸干，用有机溶剂溶解，上样于硅胶柱，氯仿-甲醇或二氯甲烷-甲醇3∶1洗脱，得到的洗脱物为暗消藤的活性部位。

(5)将溶液I或溶液II上样于事先处理好的HPD-100柱，用30％，60％，90％乙醇洗脱，得到的60％乙醇洗脱物。将60％洗脱物上样于事先处理好的聚丙烯酰胺柱，用10％乙醇，95％乙醇洗脱，得到的10％洗脱物。

(6)将溶液I或溶液II上样于事先处理好的HPD-100柱，用30％，60％，90％乙醇洗脱，得到的60％乙醇洗脱物。将60％洗脱物蒸干后用热水溶解，分别用乙醚(或氯仿，二氯甲烷等弱极性溶剂)萃取后，正丁醇萃取，得到的正丁醇萃取液。

(7)将溶液I或溶液II上样于事先处理好的HPD-100柱，用30％，60％，90％乙醇洗脱，得到的60％乙醇洗脱物。60％洗脱物蒸干，用有机溶剂溶解，上样于硅胶柱，氯仿-甲醇或二氯甲烷-甲醇3∶1洗脱，得到的洗脱物强心苷活性部位。

(8)溶液I或溶液II上样于事先处理好的聚丙烯酰胺柱，用10％乙醇，95％乙醇洗脱，得到的10％洗脱物。10％洗脱物浓缩至无醇味，密度为0.80-1.10的浓缩液，上样于事先处理好的HPD-100柱，用30％，60％，90％乙醇洗脱，得到的60％乙醇洗脱物。