[发明专利]一种生物碱类化合物及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及生物碱类化合物及其制备方法，具体涉及一种具有抗肿瘤活性的化合物，和其药学上可接受的盐；本发明也涉及这一化合物的微生物发酵方法和这一化合物在制造抗肿瘤药物上的用途。 

背景技术

肿瘤是一类严重威胁人类健康的多发病和常见病，发病率和死亡率一直呈上升趋势，目前已成为第一位致死疾病。癌症死亡率前三位是肝癌、胃癌、肺癌，我国是世界上肝癌高发国家之一，发病率在1/万左右。肝癌迄今处于一种严重缺乏有效治疗药物的状况，由于对肝癌缺乏有效控制方法，患者的预后极差。除早期可手术患者的5年存活率达80～90％外，不能手术患者，至症状发作后的平均存活时间只有3～4个月，发展中国家全部肝癌病例的平均5年存活率仅为5％左右。此外，中、晚期肝癌临床治疗的一个棘手问题是癌痛，当患者最终开始使用吗啡类镇痛药物后，由于其严重的药物依赖性，只有通过用药剂量迅速而持续的增加，才能达到止痛的作用，而连续不断的大剂量镇痛药物使用，又加重了肝脏的负担，从而使癌症的恶性程度进一步加剧。因此，开发新的抗肿瘤类药物就显得十分紧迫与必要。 

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种用于治疗肿瘤疾病的新的抗肿瘤类药物A，其分子式为C₇H₉FN₂O₄，分子量为216，化学结构式如式(I)所示。熔点141-143℃，外观呈白色粉末，它在药学上可接受的盐是盐酸盐、硫酸盐或者有机盐。 

本发明涉及的化合物A的结构采用核磁共振、红外等光谱学的方法确定。 

本发明的另一个目的是提供这种抗肿瘤抗生素的发酵用菌种和制备方法。 

经初步测试，化合物A在体外能有效抑制多种肿瘤细胞的生长，其IC₅₀在0.9-56.7μmol/L范围内，具有显著的抗肿瘤活性。 

式1 

本发明的吲哚酮类化合物A是从广西省太化县都阳山坡的土壤中分离得到假浅灰链霉菌Y05A-1070(CGMCC No.：2362)的发酵培养物中提取得到，制备方法的具体步骤如下： 

(1)链霉菌Y05A-1070(CGMCC No.：2362)的斜面培养方法：斜面 培养基组成(1L)：可溶性淀粉20g，NaCl 0.5g，KNO₃1g，K₂HPO₄0.5g，FeSO₄0.01g，MgSO₄.7H₂O0.5g，琼脂份20g，pH 7.0。28-30℃，培养7天。 

(2)链霉菌Y05A-1070(CGMCC No.：2362)的种子液培养方法：种子培养基组成(1L)：黄豆粉5～15g，酵母膏3～7g，葡萄糖10～30g，淀粉10～30g，K₂HPO₄0.1-1.0g，(NH₄)₂SO₄0.1-3.0g，MgSO₄.7H₂O 0.1-0.5g，CaCO₃0.1-5.0g，pH 7.2。三角摇瓶装量20-60％，转速100-250转/分钟，28-32℃，培养20-48小时。 

(3)链霉菌Y05A-1070(CGMCC No.：2362)的发酵方法：发酵培养基组成(1L)：花生粉10-25g，酵母膏5-30g，葡萄糖0.5-30g，蛋白胨0.1-10g，(NH₄)₂SO₄0.1-10g，KCl 0.1-3g，pH 7.0。发酵罐装量20-60％，接种量3-12％，转速100-250转/分钟，28-32℃，培养5-7天。发酵结束后，发酵产物经过板框压滤机过滤后，得到菌丝体和发酵滤液两部分。 

(4)步骤(3)得到的菌丝体部分， 

(a)用清水洗2-3遍后，挤掉大部分水分，常温下凉干； 

(b)菌丝体用甲醇提取数次，提取物减压浓缩得到浸膏； 

(c)浸膏用蒸馏水分散，用乙酸乙酯提取数次，经100-200目硅胶柱(流动相为氯仿-乙酸乙酯梯度洗脱)分离和重结晶纯化，得到化合物A。 

经本发明制备的化合物体外能有效抑制多种肿瘤细胞的生长，具有显著的抗肿瘤活性。