[发明专利]用于制备检测DNA甲基化试样的试样处理液和试剂盒无效
| 申请号： | 200810008337.1 | 申请日： | 2008-02-26 |
| 公开（公告）号： | CN101255476A | 公开（公告）日： | 2008-09-03 |
| 发明（设计）人： | 梶田昌裕;酒井绫子;山本宪明;石原英干 | 申请（专利权）人： | 希森美康株式会社 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京金之桥知识产权代理有限公司 | 代理人： | 梁朝玉;刘良勇 |
| 地址： | 日本兵库县神户市*** | 国省代码： | 日本;JP |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 制备 检测 dna 甲基化 试样 处理 试剂盒 | ||
1.一种用来制备DNA检测用试样的试样处理液，其特征在于：所述试样处理液含有蛋白酶和水性溶剂。
2.如权利要求1所述的试样处理液，其特征在于：还含有表面活性剂和/或离液剂。
3.如权利要求2所述的试样处理液，其特征在于：表面活性剂是选自十二烷基硫酸钠、十四烷硫酸钠、十二(烷)磺酸钠、十四烷磺酸钠、胆酸钠、脱氧胆酸钠、牛磺胆酸钠和牛磺脱氧胆酸钠中的至少一种。
4.如权利要求2所述的试样处理液，其特征在于：离液剂是选自硫氰酸胍、硫氰酸钠、盐酸胍、碘化钠、碘化钾和尿素中的至少一种。
5.如权利要求1～4中任一项所述的试样处理液，其特征在于：其中还含有可以切断DNA的切断剂。
6.如权利要求1～4中任一项所述的试样处理液，其特征在于：其pH值为7～10。
7.一种制备DNA甲基化检测用试样的试剂盒，其包括：
由权利要求1～4其中任一所述的试样处理液构成的第一试剂；
含将DNA所含非甲基化胞核嘧啶诱变为其他碱基的诱变剂的第二试剂。
8.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于：所述诱变剂为重亚硫酸盐。
9.如权利要求8所述的试剂盒，其特征在于：所述重亚硫酸盐的浓度为3～10M。
10.一种DNA甲基化检测用试样的制备方法，包括：
混合步骤，将含有蛋白酶和水性溶剂的试样处理液和含有细胞的生物样本混合；
诱变步骤，在所得混合液中加入可使DNA所含非甲基化胞核嘧啶转换成其他碱基的诱变剂，将混合液中的DNA所含非甲基化胞核嘧啶转换成其他碱基。
11.如权利要求10所述的方法，其特征在于：所述生物样本为血清、血浆、生物组织或乳腺分泌液。
12.如权利要求10或11所述的方法，其特征在于：所述细胞为肿瘤细胞。
13.如权利要求10或11所述的方法，其特征在于：还包括溶解步骤，即在混合试样处理液和生物样本之前，先用含表面活性剂和/或离液剂的溶解液溶解含细胞的生物样本。
14.一种DNA甲基化检测方法，包括：
混合步骤，将含有蛋白酶和水性溶剂的试样处理液和含有细胞的生物样本混合；
诱变步骤，在所得混合液中加入可使DNA所含非甲基化胞核嘧啶诱变为其他碱基的诱变剂，将混合液中的DNA所含非甲基化胞核嘧啶变为其他碱基；
检测步骤，用在诱变步骤中获得的DNA甲基化检测试样和与诱变步骤前混合液中的DNA一定区域杂交的多核甙酸检测DNA甲基化检测试样中所含DNA的甲基化。
15.如权利要求14所述的方法，其特征在于：所述的DNA一定区域是含有基因CpG岛的区域。
16.一种试样处理液作为制备检测DNA甲基化试样的应用，其特征在于：所述的试样处理液中包含有蛋白酶和水性溶剂。
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